T【药学论文开题报告】.doc

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1、药学论文・T作者：杨占出，陈静宏，楚雍烈，曹峻岭，王治伦，师钟丽，郭雄【关键词】一氧化氮合酶摘要：目的探讨T2毒素对软骨细胞合成一氧化氮(NO)的影响。方法胎儿软骨细胞体外培养，用MTT法检测软骨细胞存活率；用Griess重氮化法测定软骨细胞培养上清液中NO含量；用Westernblot检测软骨细胞一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果T2毒索在质量浓度在l-2000^g/L的范围内，软骨细胞存活率对其呈较典型的浓度依赖关系和时间依赖关系，而且随着作用时间的延长,浓度依赖关系更为明显；T2毒素刺软骨细胞分泌NO和表达iNOS蛋白。结论T2毒素引起的软骨细胞损伤和生长抑制

2、与T2毒素刺激软骨细胞表达iNOS蛋白和分泌NO增多有关。关键词：T2毒素；软骨细胞；一氧化氮；一氧化氮合酶ABSTRACT:ObjeeliveToinvestigatetheeffectsofT2toxinonnitrieoxide(NO)productionandnitricoxidesynthase(iNOS)expressioninchondrocytes.MethodsHumanchondrocytesculturedinvitroweretreatedwithdifferentconcentrationsofT2toxinindifferenttime(1

3、・5day)・Cel1viabi1ityofthetreatedcellswasmeasuredbyMTTassay;ThelevelsofNOinculturemediaweredetectedbycolorimetricmethodofGriessassay;iNOSproteinwasmeasuredbyWesternblot・ResultsDosedependentandtimedependenteffectsofT2toxinwerefoundonT2toxintreatedchondrocyteswithinacertainrangeofconcentra

4、tion(1・2000/zg/L)andaperiodsoftime(1・5day);ThelevelsofNOinT2toxintreatedculturemediawerehigherthanthatofnormalcontrolgroup;OverexpressionofiNOSwasdetectedinT2toxintreatedcells・ConclusionT2toxincanenhanceNOproductionandupregulateexpressionofiNOS.NOplaysanimportantroleinT2toxininducedgrow

5、thinhibitoryandtoxiceffects.KEYWORDS:T2toxin;chondrocytes;nitricoxide;nitricoxidesynthaseT2毒素的病因学意义是目前大骨节病硏究领域的热点。大量硏究发现T2毒素可致软骨细胞损伤［1］。本硏究采用胎儿软骨细胞休外培养，观察T2毒素对软骨细胞分泌一氧化氮(nitricoxide,NO)及其诱导型一氧化氮合酶(nilTicoxidesynthase,iNOS)的影响，旨在探讨T2毒素致软骨细胞损伤的分子机理。1材料与方法1.1试剂与仪器DMEM培养基(GIBCO)、胰蛋白酶、透明质酸酶和

6、II型胶原酶(Sigma)、iNOS单克隆抗体(博士德生物工程公司)、四中基偶氮I坐(MTT)、二中基亚砚(DMSO)、N1荼乙二胺盐酸盐和磺胺(华美生物工程公司)，T2毒素由中国军事医学科学院毒物药物硏究所杨进生教授赠送，752型紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），ETx800型通用酶标仪（基因公司）。1.2软骨细胞培养及分组中孕引产胎儿的软骨细胞原代培养方法同文献[2]。第一代软骨细胞培养48h后随机分为对照组、T2毒素处理组，将不同质量浓度T2毒素（1、5、10、20、50、100、1000、2000、4000、8000“g/L）溶于DMEM完全培养基中

7、（含150mL/LFCS，青霉素100U/mL，链霉素100U/mL）。根据T2毒素对软骨细胞的作用，再选择1、10、20/zg/LT2毒素处理组作进一步的检测。1.3观察指标1.3.1MTT法检测细胞存活率第一代软骨细胞悬液200zzL（含5x103的软骨细胞）接种于96孔组织培养板，贴壁生长48h后，加入含不同浓度T2毒素的培养液，每组设6个平行孔，分别培养l-5d，然后加入20/zLMTT（5g/L），继续培养4h后，弃去培养液，加入二甲基亚砚150//L，用力振荡5min使甲月替结晶溶解完全，最后置于酶标仪490mn处测定A値。细胞存活率用下