海豚链球菌胞外产物的抗原性及免疫保护效果研究.pdf

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1、第45卷第4期2015年4月中国海洋大学学报PERl0DICALoF0CEANUNIVERSITY0FCHINA45(4)：035～039Apr．，2015海豚链球菌胞外产物的抗原性及免疫保护效果研究。孙敏，唐小千，赵娜，绳秀珍”，战文斌(中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，山东青岛266003)摘要：以健康牙鲆(P口razif^￡^ysDzimcP“s)为攻毒对象，检测了5株海豚链球菌(sf化户￡o∞cf“5i咒i口e)菌株的毒力特性。结果显示，菌株NUF849、NUF812、NUF701、NUF693和NUF633对牙鲆的半数致死浓度分别为3．O×

2、105、1．1×106、4．2×107、1．2×107和2．4×107cFU／mL。以平板玻璃纸法分别制备5株海豚链球菌的胞外产物，sDsPAGE分析其蛋白组成。结果显示，5株海豚链球菌胞外产物均存在14、20、27、30、38、46、57和68kDa等主要蛋白条带，而36kDa蛋白条带仅存在于毒力较强的NUF849、NuF812和NUF693菌株。以强毒株NuF849的胞外产物免疫健康牙鲆，并在免疫后28d进行攻毒，取攻毒后存活牙鲆的血清对5株海豚链球菌的胞外产物进行western-blot检测。结果显示，制备的抗血清可与5株菌共有的46、50、62及

3、88kDa蛋白条带发生阳性反应。以制备的强毒株NUF849和弱毒株NUF701胞外产物分别免疫牙鲆，在免疫后42d以菌株NUF812对免疫牙鲆进行攻毒。结果显示，菌株NUF849和NuF701胞外产物对牙鲆感染的相对免疫保护率分别为32．4％和16．2％。研究结果为揭示海豚链球菌胞外产物的毒力特性和亚单位疫苗候选蛋白的筛选提供了参考数据。关键词：海豚链球菌；牙鲆；胞外产物；抗原性；免疫保护中图法分类号：S94文献标志码：A文章编号：1672—5174(2015)04一035一05DOI：10．16441／j．cnki．hdxb．20140038海豚链球菌

4、(S￡理声￡ofofc“si咒如P)是养殖鱼类的重要细菌性病原，可感染多种海水和淡水鱼类，由其引发的疾病在世界范围内均有暴发与流行，常见于养殖的牙鲆(P口阳zi以加ysozi眦cP“5)、大菱鲆(S∞肋娩nzm“sm口zim“5)、蛳鱼(N口甜fm抛sd“f￡o，．)、美国红鱼(Sfi—nP船。声socPZZnf“s)、罗jE鱼(()rPoc^romis"iZofif口)、虹鳟((h∞砌yf^“sm次iss)、斑点叉尾鲴(，c把Z“r“5p“以f缸一￡“s)等[11]，给水产养殖业造成了巨大的经济损失。在众多的鱼类疾病防治措施当中，接种疫苗不仅可以有效防

5、控鱼类传染性疾病的发生，同时又能避免微生物产生耐药性，降低水体污染等问题，已逐渐发展成为鱼类疾病防控的主流手段[8。9]。然而，要研制切实有效的海豚链球菌疫苗，就需要对该菌的毒力特性及其致病机理等方面进行深入的研究。胞外产物(Extracellularproducts，ECPs)是细菌在生长与繁殖过程中不断向环境中释放的代谢产物，主要含有各类活性酶和毒素等，目前已有报道的链球菌胞外产物主要有蛋白酶、DNA酶、透明质酸酶、溶血素、3一磷酸甘油脱氢酶、类M蛋白、纤连蛋白、烯醇化酶及溶血素等[10。，它们是链球菌致病力的重要组成部分，同时具有良好抗原性，因此是

6、制备亚单位与基因疫苗的重要候选材料。另有研究显示，同种细菌的不同分离株在胞外产物的组成、含量及其致病力方面会存在一定差异[11。13]，因此通过比较研究各毒力差异菌株胞外产物的组成情况，可为深入了解细菌各胞外产物组分的活性及其致病力与致病机理提供重要参考，同时也将为细菌亚单位及基因疫苗的开发提供基础数据。然而，目前有关海豚链球菌不同菌株间的胞外产物组成差异情况及其与致病力之间的相互性研究却少有涉及。为此，本研究选择5株海豚链球菌对其毒力特性进行检测，分析其胞外产物的蛋白组成及抗原性，同时比较了强毒株与弱毒株胞外产物的免疫保护效果，以期为了解链球菌致病特性

7、及筛选亚单位疫苗候选组分提供基础数据。1材料与方法1．1实验用鱼与菌株健康牙鲆购自日照某养殖场，体重(20±5)g，蓄养于40咖×40锄×70cm水槽内，水温(23±1)℃，全天充气，日换水2／3，每日投喂1％鱼体重的饲料，暂养7d后用于实验。所用的5株海豚链球菌菌株M脯49、M脯12、M】IV01、MⅡ、693和MⅡ、633由实验室保藏[14]。*基金项目：国家自然科学基金项目(31172429；31302216)；国家科技支撑计划项目(2012BADl7801)；山东省自然科学基金项目(ZR2011CQ022)资助收稿日期：2014一02—20；修订

8、日期：2014一05一03作者简介：孙敏(1988一)，女，硕士生，从事水产动物