堆型艾美耳球虫3-1E重组质粒PLGA微球包被技术研究.pdf

《堆型艾美耳球虫3-1E重组质粒PLGA微球包被技术研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、分类号：S墨52：鱼5密级：公珏单位代码：学号：100862008457堆型艾美耳球虫3．1E重组质粒PLGA微球包被技术研究ThePLGAmicroballoonscoatedTechnologystudyof3-1ErecombinantofEimeriaacervttLina学位申请人：指导教师：学科专业：学位类别：授予单位：答辩日期：常丽云秦建华教授预防兽医学农学硕士河北农业大学二。一一年五月二十九日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致

2、谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰垦盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：览确么签字日期：≯一f年‘月二日’●’^学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇垦盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盎些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等

3、复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：麝矾幺导师签名：签字日期：％『，年f月2日签字日期：伽f学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：日摘要＼嫩y惝飞删B97297堆型艾美耳球虫是集约化养鸡场中最常见的球虫种类之一。堆型艾美耳球虫寄生于小肠、属于中等毒力的球虫，给养禽业带来严重的经济损失。鸡球虫病主要依靠药物防治和活疫苗免疫，由于药物的耐药性和药物残留等问题，活疫苗免疫又存在成本高、免疫要求高等缺陷，防治球虫病急需寻求新途径。DNA疫苗的一个显著优势是刺激机体产生

4、广泛的细胞免疫反应和持久的免疫记忆，但裸质粒DNA疫苗注射给药方式不够方便、组织刺激性大、生产成本高；裸质粒DNA疫苗口服免疫在实际应用时由于受到胃酸、胃蛋白酶等对抗原的裂解作用的影响，导致了质粒疫苗的失活，产生的免疫效果较低，常须加大免疫剂量才可获得足够的免疫力。本试验以疏水性材料乳酸丹径基乙酸共聚物(PLGA)为研究对象，将鸡堆型艾美耳球虫(E．acervulina)重组表达质粒pcDNA3．1．3．1E包裹，制成微球并用该微球进行动物试验，表明重组表达质粒pcDNA3．1—3-lE能成功的被PLGA包裹并发挥免疫功效。

5、本试验用PLGA将重组表达质粒pcDNA3．1-3．1E，运用水包油包水(W／O／W)乳化技术制备pcDNA3．3．1EPLGA微球，分别测定微球的形态、粒径、质粒DNA包封率、载药量和释放程度，体外分别进行模拟鸡胃液和肠液试验并且比较肌注裸质粒鸡群和口服免疫鸡群的免疫效果。结果显示微球的包封率，载药百分比分别是82．7％，1．89％，它的粒径80％d、于12um。在模拟鸡的胃肠液累积释放试验中，它的累积释放能力依次为pH3．0>pH7．4，在模拟的鸡的肠液中，微球30d累积释放81．3％，表明了微球具有一定的缓释效果。裸质

6、粒与微球中质粒超螺旋比例差距不明显，这表明在包被过程中的超螺旋质粒未发生降解。将PLGA微球口服免疫，重组质粒pcDNA3．3．1E肌注免疫，后ld，10d，30d样品，免疫后ld，10d口服微球免疫组和肌注组各组织均可检测到3．1E基因，免疫后30d，口服微球免疫组各组织均仍检测到3．1E基因，而肌注组仅在注射部位检测到3．1E基因，表明口服的pcDNA3—3-lEPLGA微球能在机体内释放表达且持续释放至少30d。pcDNA3．3．IEPLGA微球免疫后不同时间鸡体外周血淋巴细胞转化水平和不同时间鸡外周血中IgG含量显著

7、增高，表明口服pcDNA3—3一IEPLGA微球免疫能有效的提高雏鸡的细胞免疫和体液免疫水平。通过增重、病变、卵囊产量、抗球虫指数(ACI)等多项参数来对重组质粒pcDNA3．3—1EPLGA微球免疫效果进行评价。结果显示重组质粒pcDNA3．3．1EPLGA微球口服组攻虫后鸡的卵囊产量下降88．72％，肠道病变记分降低63．96％，并使鸡的相对增重率达96．89％，ACI值为165．19。PLGA能成功地包裹质粒pcDNA3．3．1E，能有效地保护pcDNA3．3．1E在胃肠环境中不受破坏，增强免疫应答。关键词：鸡；堆型艾

8、美耳球虫；PLGA微球：包被技术；免疫ThePLGAmicrobaHoonscoatedTechnologystudyof3-1ErecombinantofEimeriaacervulinaAuthor：ChangliyunProfessor：QinJian-huaMajor：Preven