棉花枯萎病菌致病力分化及遗传多样性研究.pdf

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1、分类号：坠兰2：l密级：公珏单位代码：!QQ墨鱼一学号：2QQ墨兰23棉花枯萎病菌致病力分化及遗传多样性研究PathogenicDifferentiationandGeneticDiversityofFusariumoxysporum￡sp．vasinfectum学位申请人：王晓光指导教师：马平研究员学科专业：植物病理学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二O一一年五月二十九日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发

2、表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇垦盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：五赅朝签字日期：≥J『年／月／日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇堡盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑皇垦盛些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权

3、书)学位做作者繇玉蚴翩虢签字日期：汐f

4、年多月J日签字日期：学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：月／日，摘要

5、III]llIllUllIlllIIlY1897378棉花枯萎病(cottonfusariumwilt)是由尖孢镰刀菌萎蔫专化型(Fusariumoxysporum￡sp．vasinfectum)引起的棉花生产上危害最为严重的世界性病害之一。目前，世界上已经报道棉花枯萎病菌有8个生理小种，我国分布有3号、7号和8号生理小种，其中7号生理小种是我国棉花枯萎病菌的优势小种，其毒力强，分布广，危害严重，且不同菌系间存在明

6、显的致病力分化。因此，明确棉花枯萎病菌的生理小种分布、致病力分化和菌系内部的遗传多样性，可为棉花的抗病育种、品种的合理布局以及棉花枯萎病的综合防治提供理论依据。本研究首先以棉花枯萎病菌3号、7号和8号生理小种标准菌株和3个供试棉花枯萎病菌菌株为材料，通过对酶切时间、预扩增模板浓度、选择性扩增模板浓度进行梯度优化试验，建立了基于Hae[II六融tI酶切的适合棉花枯萎病菌的AFLP技术体系，即酶切反应：250ngDNA经HaelII／PstI37℃酶切2h后，加入lIlL／'stI再进行酶切2h；连接反应：酶切产物25℃连接过夜(≥16h)；PC

7、R反应中，连接产物稀释10倍(Plo)作为预扩增模板，预扩增产物稀释50倍(PloSso)作为选择性扩增模板进行PCR扩增。利用优化后的AFLP技术可将3号、7号和8号生理小种进行有效地区分。本研究利用AFLP技术对85个棉花枯萎病菌进行了遗传多样性分析，结果表明，棉花枯萎病菌不同菌株之间的遗传距离在0．51～1．00之间，存在较高的遗传多样性。聚类分析表明，在O．51的Dice相似系数水平上，供试的85个菌株被划分为4个AFLP类群。AGsI类群包括1个菌株Race3，为3号生理小种标准菌株；AGsII类群包括1个菌株Race8，为8号生理

8、小种标准菌株；AGsIII类群包括7号生理小种标准菌株和74个供试菌株，说明74个供试棉花枯萎病菌菌株为7号生理小种，同一小种内不同菌株之间存在一定的遗传分化。AGslV类群中包括8个菌株，不同于3号、7号和8号生理小种，与其他供试菌株的遗传分化较大。基于AFLP多态性划分的类群表明，AFLP类群与生理小种之间存在一定相关性，与菌株的地理来源和致病力之间无明显相关性。进一步对AGsIV类群中的8个菌株结合翻译延伸因子(EF．10t)基因、B．微管蛋白(BT)基因和磷酸透性酶(PHO)基因序列进行了系统发育分析，结果表明8个菌株均为棉花枯萎病菌

9、，其中5个菌株与澳大利亚的棉花枯萎病菌亲缘关系最近，推测可能为疑似澳大利亚菌株的新基因型菌株。其它3个菌株与7号生理小种标准菌株在同一进化群中，为7号生理小种。致病力测定结果表明，不同菌株对冀棉11棉花品种的致病力强弱存在明显差异，根据病情指数划分为强、中和弱3个致病类型，强致病力菌株56个，占供试菌株的65．88％，中等致病力菌株20个，占供试菌株的23．53％，弱致病力菌株9株，占供试菌株的lO．59％。AGsIV类群中5个疑似澳大利亚菌株的新基因型菌株在冀棉1l棉花品种上均表现弱致病力，另外3个7号生理小种菌株分别表现强、中等和弱致病力

10、。关键词：棉花枯萎病菌；AFLP：遗传多样性；致病性●PathogenicDifferentiationandGeneticDiversityofAuthor：Wa