划板挑单克隆.doc

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1、质粒提取摇菌前，是否一定要划板挑单克隆？小白提问，质粒提取摇菌前，是否一定要划板挑单克隆？我们实验室没有菌环等等微生物仪器……导师一定要做，请教各位……划板挑单克隆可以使细菌的生长更加旺盛,如果菌种没有长时间冻存,而是很短时间存于-20冰箱或者四度,个人认为不需要挑单克隆,可以先接菌到少量培养基中过夜,然后再用此过夜得到的细菌接种到大量培养基中摇菌提质粒.你导师的那么想做的想法估计是菌放很久了，想先活化一下，而且划线可以防止万一有污染，保证是单克隆长出来的，没有接种环可以高压一盒枪头，用枪头挑就可以了。我们都这么做，接种环反复烧太麻烦啦，有也不用,呵呵.

2、细菌试验还是比较宽松的我觉的挑单克隆会好点，毕竟质粒一般都有抗性筛选的，这样做比较安全，对于挑斑的工具，我们实验室用灭菌的牙签，很方便的。没有条件创造条件。一根牙签（枪头）沾取菌液，划3条平行的直线；换第二根无菌牙签，从第三条线的尾部沾取少量菌体，然后继续划3条平行直线；重复此过程。此过程中，菌体量逐步减少，必然会在某个位置产生单菌落【求助】谁知道为什么细菌划板生长，液体培养基不生长我用的是带有kana抗性的EGFP质粒在LB固体培养基中生长然后，第一次挑单克隆液体培养，生长良好，大提良好，转染良好，可见荧光然后，第二次从板子里挑单克隆液体培养，过夜，培

3、养基澄清，以为是挑的单克隆有问题，继续选了两个，依然澄清哪位达人帮忙分析一下T_T会不会有噬菌体污染？确定插入序列对菌体生长无影响且无噬菌体污染后，建议进行如下操作：单菌落进行划线过夜培养活化（保证抗性的正确和抗生素的浓度），将活化后的菌转入2—3ml的液体培养基中培养8小时（作为种培养），然后将1ml种培养液放入500ml同样抗性和抗生素的浓度的液体培养基中过夜培养，若仍澄清，培养至20-22小时或更长时间。质粒提取摇菌前，是否一定要划板挑单克隆？小白提问，质粒提取摇菌前，是否一定要划板挑单克隆？我们实验室没有菌环等等微生物仪器……导师一定要做，请教各

4、位……划板挑单克隆可以使细菌的生长更加旺盛,假如菌种没有长时间冻存,而是很短时间存于-20冰箱或者四度,个人认为不需要挑单克隆,可以先接菌到少量培养基中过夜,然后再用此过夜得到的细菌接种到大量培养基中摇菌提质粒.你导师的那么想做的想法估计是菌放很久了，想先活化一下，而且划线可以防止万一有污染，保证是单克隆长出来的，没有接种环可以高压一盒枪头，用枪头挑就可以了。我们都这么做，接种环反复烧太麻烦啦，有也不用,呵呵.细菌试验还是比较宽松的我觉的挑单克隆会好点，究竟质粒一般都有抗性筛选的，这样做比较安全，对于挑斑的工具，我们实验室用灭菌的牙签，很方便的。没有条件

5、创造条件。谢谢大家，那我没菌环怎么划板呢？……一根牙签（枪头）沾取菌液，划3条平行的直线；换第二根无菌牙签，从第三条线的尾部沾取少量菌体，然后继续划3条平行直线；重复此过程。此过程中，菌体量逐步减少，必然会在某个位置产生单菌落