解剖小白鼠实验.ppt

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1、细胞原代培养(Cellprimaryculture)实验目的了解细胞体外培养的原理、基本方法，了解无菌操作方法及注意事项。学习观察体外培养细胞的形态及生长状况。实验原理用直接从机体获得的细胞进行的培养称为原代培养。这种培养过程主要是采用无菌操作的方法，把组织（或器官）从动物体内取出，经酶消化处理，使分散成单个细胞，然后在人工条件下培养，使其不断地生长和繁殖。原代培养是建立各种细胞系的第一步。消化培养法又称为组织消化分散法：将妨碍细胞生长的细胞间质去除，使细胞分散，形成悬液，按不同浓度接种培养瓶培养。实验仪器超净工作台，压力蒸汽消毒

2、器，电热干燥箱，滤器，酸缸CO2培养箱倒置显微镜自动双重纯水蒸馏器，纯水仪耗材：培养瓶，吸管，电动吸引器超净台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器，除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。滤器滤器工作原理CO2培养箱CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2。使用CO2培养箱应注意的问题：①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。②保持培养箱内空气干净。定期消毒（90℃，14h)。③箱内无菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度，避兔培养液蒸发。倒置显微镜

3、自动双重纯水蒸馏器纯水仪培养板培养瓶实验材料2月龄的小鼠实验试剂（1）1640-RPMI培养液（2）小牛血清（3）青、链霉素（4）PBS液（5）5％NaHCO3（6）75％酒精实验步骤一、培养前的准备工作（1）清洗与消毒（2）配制溶液（3）紫外线消毒（4）洗手和着装（5）进入无菌室实验步骤动物细胞原代培养过程图方法与步骤（1）动物拉椎处死（2）取肝及剪碎：剖开腹部，将肝脏取出，放入小培养皿中，用PBS液洗涤1次；将肝剪成1mm大小的块，再用PBS液洗涤2次，直到液体澄清。（3）消化及分散组织块：将上述清洗过的组织放入试管内，加入的

4、0.25％胰蛋白酶液，完全没过组织，置37℃水浴中消化20～30min，每隔10min摇动一次，直到组织块变得疏松，粘稠，且颜色略变为白色为止。取出试管，吸去胰蛋白酶液，加入5ml培养液，用吸管反复吹打组织块，使其分散成细胞悬液，取上清液至另一试管中。（4）观察与计数：从细胞悬液中取出1滴滴于载玻片上，显微镜下观察细胞的数目。看到球型的细胞，证明消化下来细胞，实验成功。作业:1.在细胞培养过程中如何防止污染?无菌操作的几个注意事项1、操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。2、点燃酒精

5、灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。3、操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。4、不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。5、瓶子开口后要尽量保持45°斜位。6、吸溶液的吸管等不能混用。7、自取材开始，保持所有组织细胞处于无菌条件。细胞计数可在有菌环境中进行。8、在超净台中，组织细胞、培养液等不能暴露过久，以免溶液蒸发。9、凡在超净台外操作的步骤，各器皿需用盖子或橡皮塞

6、，以防止细菌落入。