电泳拖尾原因.doc

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1、1、可以考虑是不是样品不纯，目的产物与杂带相差不大，所以要多跑一段时间才有尾巴。参考marker,marker应该不会有。如果有的话说明配胶有问题。2、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液，加2微升溴酚蓝便可，注意上样浓度；3、可能是原液浓度太大造成的；4、可能DNA已降解。5、在提取前对样品进行一定的脱腐处理呀。很简单。有一种TENPbuffer，文献中查的到的。6、DNA降解避免核酸酶污染。7、DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。8、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA

2、链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。9、DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。10、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。11、DNA变性，?电泳前勿加热，用20mMNaCl缓冲液稀释DNA。12、电泳缓冲液的PH根据片段的大小选择合适的胶浓度和电压，胶要完全凝好再用（微微发白）13、根据目的条带大小，选作不同浓度的胶，这个很重要，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。一般是1%的。煮胶时，沸腾3次以上，煮胶一定要均匀，加入尽量少的EB

3、或核酸染料。14、点样前，先把胶放在槽里，空跑10分钟，预电泳，让电泳液均匀。15、预电泳后，先冲洗胶孔，点样时样品要被垂直点如，在胶孔中来回移动，使样品均匀进入。16、电泳的电压根据电泳槽选定，别太大，不然会出现微笑型条带注：凝胶回收DNA实验的关键在哪里?参考见解：最关键的是切胶之后,溶胶的那一步.切胶的时候要尽量把多余的琼脂糖凝胶切干净,按照实验步骤,第一步应该是将胶充分的溶化.这以后步一定要做充分,保证凝胶已经完全溶解了.加乙醇这步也很关键，当凝胶溶解后最好多过几次柱子。还有就是洗脱的那一步。洗脱的时候最好用加热到

4、60度的洗脱液洗脱，如果实在效果不好可以分两次洗脱。注：琼脂糖凝胶电泳相关知识琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电

5、场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间，离子强度0.02~0.05为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。操作流程准备干净的配胶板和电泳槽注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。选择电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要

6、分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。适合的电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可

7、以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。电泳的合适电压和温度电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA电泳，温度应该低于15℃。注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模

8、糊和条带缺失的现象。乙醇沉淀可以去除多余的盐，用酚可以去除蛋白。注意变性的DNA样品可能导致条带模糊和缺失，也可能出现不规则的DNA条带迁移。在上样前不要对DNA样品加热，用20mMNaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。DNA的上样正确的DNA上样量是条带清晰的保证。注意太多的DNA上样量可能导致DNA