胶体金方法的优势以及灵敏度比对数据.doc

《胶体金方法的优势以及灵敏度比对数据.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、胶体金方法的优势以及灵敏度比对数据**公司新推出的胱抑素C测定试剂盒，采用胶体金包被抗体，胶体金颗粒在546nm有最大吸收，当胶体金颗粒和样本中的CysC抗原发生凝集时，在546nm的吸光度下降，吸光度值决定于CysC的浓度。此方法避免了抗体在反应系统中初始吸光度较低造成灵敏度低的缺陷。采用546nm可见光区检测胶体金颗粒吸光度的改变，使得测试结果特异性更强，而且吸光度变化更为稳定。1.1概述免疫胶体金技术（ImmunogoldTechnique）是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原-抗体反应的一种免疫标记技术。

2、胶体金（colloidalgold）是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂（如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等）的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用形成一种稳定的胶体状态。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合只是静电结合，所以蛋白质的生物学特性不受影响。胶体金除了可以与蛋白质分子结合以外，还可以与许多其它生物大分子（如：SPA、PHA、ConA等）结合。利用胶体金的一些物理性质（如：高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应等）以及结合物的免疫和生物学特性，胶体金

3、被广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等许多领域，并且发展出了一系列实验和检测技术。1.2反应机理利用免疫胶体金技术进行液相免疫测定是基于金溶胶的重要特性：金颗粒与抗原（抗体）形成的结合物在溶胶状态颜色基本上保持不变，当与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚，溶胶颗粒极度增大，光散射随之发生变化，颗粒也会沉降，溶液的颜色变淡甚至变成无色或蓝色（图1、图2）。这一原理可应用于定性或定量的免疫反应。图1：胶体金液相免疫测定原理图2：CysC反应曲线免疫胶体金技术与胶乳增强免疫比浊法相比，该方法检测的灵敏

4、度有了很大的提高。1.3与同类检测产品（胶乳加强免疫比浊法）比较：取**公司的试剂与B公司的试剂同在日立7060上对比检测，测试结果如下：【定标数据对比】校准液：B公司校准液，浓度为：0.00；0.50；1.00；2.00；4.00mg/L共计五点校准7校准液：***公司校准液，浓度为：0.00；0.50；1.00；2.00；4.00；8.00mg/L共计六点校准B公司：Cysc1定标数据如下：S1S2S3S4S5Cysc1-2425527427354424711443572754457-14209244270

5、55428211743112624387**：Cysc定标数据如下：S1S2S3S4S5S6CYSC-22220244-47419852-125320187-417318492-848716932-1053115509-20820274-49619972-121419461-414218862-833316733-10539155921）通过实验测试以吸光度的变化率来看：从标准液各点的吸光度变化上看，B公司试剂的变化远远小于**试剂的变化。B公司标准液浓度由0.5mg/L到1.0mg/L,吸光度变化率为27即：

6、0.0027。**公司标准液浓度由0.5mg/L到1.0mg/L,吸光度变化率为750，即：0.0750。**公司的试剂吸光度变化的敏感程度远远高于B公司的产品。2）通过实验测试以吸光度的重复性来看：B公司标准液浓度0.5mg/L，S2变化率分别为：27/24，重复性很好，差异仅有3，但是对比与其自身的偏差达到：3/27=11%。**公司标准液浓度0.5mg/L，S2变化率分别为：474/496，重复性很好，差异为22，但是对比与其自身的偏差为：22/496=4.4%。7附录2：试剂精密度数据-1胱抑素CBet

7、ween-day和Within-day数据　Serum1　　1strun2ndrun3rdrun　　121212Mean10.800.790.810.810.820.810.8120.780.800.800.810.800.830.8030.800.790.810.800.810.800.8040.810.790.800.800.800.770.8050.800.820.830.800.820.820.8260.800.810.790.790.800.790.8070.790.800.820.830.790.7

8、90.8080.800.840.820.800.810.800.8190.810.790.780.780.770.770.78100.790.800.820.790.820.810.81110.810.810.820.810.800.820.81120.800.790.770.770.810.770.79130.800.800.790.790.790.800.80140.810.810