浙江师范大学微生物实验报告-实验9-环境因素对微生物生长的影响.docx

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1、实验9环境因素对微生物生长的影响一、实验目的了解常用化学消毒剂渗透压、pH对微生物的影响。二、实验原理化学消毒剂的作用机理：有机溶剂可使蛋白质及核酸变性，也可破坏细胞膜透性使内含物外溢；碘可使蛋白质失活；染料可选择性抑制或杀死微生物。在等渗溶液中，微生物正常生长繁殖；在高渗溶液（例如高盐、高糖溶液）中，细胞失水收缩。而水分为微生物生理生化反应所必需，失水会抑制其生长繁殖；在低渗溶液中细胞吸水膨胀，细菌、放线菌、霉菌及酵母菌等大多数微生物具有较为坚韧的细胞壁，而且个体较小，受低渗透压的影响不大。不同微生物对pH条件

2、的要求各不相同，它们只能在一定的pH范围内生长。pH能使蛋白质、核酸等生物大分子所带电荷发生变化，从而影响其生物活性；引起细胞膜电荷变化，导致微生物细胞吸收营养物质能力改变；改变环境中营养物质的可给性及有害物质的毒性。三、步骤标记（5%酒精、0.1%升汞、3%碘酒、5%苯酚、0.2%结晶紫）0.1mL涂布接种1.化学消毒剂贴药纸片制平板观察抑菌圈培养37℃，1d2.渗透压观察生长状况培养37℃，1d标记接种制平板（0%、2.5%、5.0%、10%NaCl）3.pH试管5mL培养基（pH3、5、7、9、11）接种0

3、.1mL培养37℃，1d观察生长状况4.抗生素制平板加抗生素标记接种观察生长状况培养37℃，1d四、结果与分析1.化学消毒剂使用0.2%结晶紫、0.1%升汞、3%碘酒、5%酒精和5%苯酚测试对实验菌种的抑菌能力，结果如图1、表1所示，0.2%结晶紫的抑菌圈最大，其次是0.1%升汞，5%酒精和5%苯酚无抑菌圈产生，由于菌液涂布不均3%碘酒的抑菌效果无法检测到。整体来看，0.2%结晶紫和0.1%升汞的抑菌能力较强。表1各化学抑制剂的抑菌圈大小图1化学抑制剂对细菌的作用化学抑制剂抑菌圈直径（cm）0.2%结晶紫20.1

4、%升汞1.53%碘酒5%酒精05%苯酚01.渗透压使用0%、2.5%、5.0%、10%NaCl溶液测定渗透压对细菌的影响，结果如图2。在0%、2.5%NaCl溶液实验菌种和大肠杆菌都能正常生长，在0%NaCl溶液中实验菌种形成菌落较大，在2.5%NaCl溶液中菌落较小。在5%NaCl溶液中实验菌种和大肠杆菌的生长都受到抑制，在10%NaCl溶液中都不生长。结果表明，实验菌种和大肠杆菌都不耐高渗透压。图2不同NaCl浓度下细菌的生长状况E：大肠杆菌，X：自行分离的实验菌种XXXXEEEE2.pH分别用pH为1、3、

5、5、7、9的培养基测试pH对细菌生长的影响，结果如图3所示。在pH1和3的条件下实验菌种不生长，在pH为5、7和9的条件下菌种都生长，其中在pH为5和7的条件下生长量较大。表明实验菌种不能在强酸环境中生长，在中强碱性环境中能生长但生长受到抑制，在弱酸性环境和中性环境中都生长良好，稍稍偏酸可能更有利于生长。实验菌大肠杆菌枯草杆菌图3不同pH环境中细菌的生长情况图4硫酸青霉素对细菌的影响1.抗生素实验菌株在硫酸靠近浸有硫酸青霉素的纸条附近不生长（图4），青霉素对实验菌株有明显的抑制生长作用。实验菌受到的抑制作用与大肠

6、杆菌和枯草杆菌相当。五、讨论1.化学消毒剂实验结果显示0.2%结晶紫的抑菌作用最大，其次是0.1%升汞。结晶紫是强染色剂，能进入菌体破坏细胞结构。升汞因为有重金属汞毒性较强。理论上来说应该是0.1%升汞地抑菌作用大于0.2%结晶紫。苯酚有一定毒性，酒精常用来消毒，但实验中可能由于苯酚和酒精浓度太低，所以没有明显的抑菌效果。菌液涂布不均匀和纸片带有液体的体积差异给实验带来了较大误差。尤其是菌液涂布不均，无法得到3%碘酒的抑菌效果。2.渗透压实验结果显示高渗透对细菌的生长有明显的抑制作用。溶液的浓度过高，细菌会失水而

7、死亡。理论上来说浓度过低细胞也会因为过度吸水膨胀而死，但是实验中0%NaCl的菌也生长较好，可能是培养基中其他物质使环境浓度和细胞液浓度相差不大，细菌的细胞壁对细胞有保护作用。实验中大肠杆菌和实验菌种的耐渗透压能力相差不大。3.pH实验结果显示强酸环境抑制细菌生长，pH为9的中强碱对细菌有一定影响，但影响没有酸性溶液强。该菌种可能更耐碱。为更好测量pH对细菌的影响，可以在pH在5到7之间以及大于9后增加几个梯度，使实验结果更加明显。4.抗生素结果显示硫酸青霉素能明显的抑制细菌生长，对实验菌株的抑制作用和大肠杆菌、

8、枯草杆菌相当。一般来说，对革兰氏阳性菌的抑制作用应大于革兰氏阴性菌，即在实验中实验菌和枯草杆菌受到的抑制作用大于大肠杆菌。实验得到3种菌没有明显的差异，原因可能是抗生素的浓度太小，接种细菌的量也太小。