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时间:2020-08-17
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1、。冻存细胞注意事项:购买的细胞经过传代后,实验时一般要求先冻存起来一些细胞(一次全部用掉有些太浪费),冻存的细胞除了能够重复试验外,还能作为备用细胞,是实验室的一种资源。为了最大限度保存细胞活力,冻存细胞的时候要慢冻。由于甘油或二甲基亚砜(DMSO)能提高细胞膜对水的通透性,不仅可使细胞内的水分渗出细胞,还能减少细胞内形成得冰晶损伤细胞,所以冻存细胞常用他们做保护剂。冻存细胞的时候需要对细胞做一定的处理,那么处理细胞时应该注意哪些事项呢?冻存细胞注意事项:1、冻存细胞前12~24h,换新鲜培养基,使细胞一直处于对数生长期。2
2、、待细胞长至80%汇合时胰酶消化,用新鲜培养基吹打后制成细胞悬液,1000rpm离心10min。悬浮细胞则直接离心。3、弃上清,加入冻存液重悬细胞沉淀,调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL。将细胞悬液分至冻存管内,每管1~1.5mL,拧紧盖子。在管壁上做好标记,标明细胞名称、冻存日期等。(冻存细胞液配方可为胎牛血清:培养基:DMSO=4:6:1或胎牛血清:培养基:DMSO=1:9:1或胎牛血清:DMSO=9:1,可根据各实验室实际条件调整)-可编辑修改-。4、按下列顺序依次降温:室温→4℃20min→-20℃
3、30min→-80℃过夜→液氮保存。也可使用程序降温盒更为方便,细胞冻存管放入程序降温盒内可直接放入-80℃过夜,再转至液氮罐内。注意程序降温盒内异丙醇的量必须高于最低刻度线;冻存5次后异丙醇需要跟换一次,以免影响冻存效果。5、冻存细胞后应取出一管复苏,检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存,为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养,观察细胞生长情况,再继续冻存。-可编辑修改-。欢迎您的下载,资料仅供参考!致力为企业和个人提供合同协议,策划案计划书,学习课件等等打造全网一站式需求-可编辑修改-
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