Waters2695高效液相色谱仪操作规程.doc

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1、Waters2695高效液相色谱仪操作规程一、开机前的准备工作：1．检查设备电源、流路、信号连接是否完好；2．流动相：配制相应的流动相，经0.22mm微孔滤膜抽真空过滤后，或检查是否需要添加。适当选择滤膜，水系/有机系（反光面朝上）。3．样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.22mm滤膜过滤。二、开机平衡系统：1．开机自检：打开电源开关，仪器开始自检（4-5min），待屏幕上方出现“Idle”自检完成。2．脱气：按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status”界面，移动光标至“DegasserMode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。一般默认是开的。3．设定

2、柱温：在“Status”界面，光标至“ColHtrSet”，输入目标温按Enter。4．清洗柱塞杆：按“Menu/Status”键回到“Menu”界面，按下排功能键“Diag”，然后再按下排功能键“PrimeSealWsh”，“Start”，冲洗1~2min后，“HALT”，“CLOSE”。5．WetPrime：在“Status”界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“DirectFunction”键，移动光标选择“WetPrime”，“OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。将每一个

3、会用到的溶剂通道按照上述操作一次。（也可各通道选25%v5ml/min，3min）。6．注射器排气泡及清洗：进入“DirectFunction”界面后，选择“PurgeInjector”，“OK”，默认数值为6，“OK”。7．清洗注射针：进入“Diagnostics”界面，按下排功能键之“PrimeNdlWsh”，“Start”，默认30秒钟，“Close”，即可返回“Diagnostics”界面。注：以上4-7为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。若发现注射器中有气泡，则可重复6）直至排除。8．平衡柱子：在“Status”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，再WetPr

4、ime操作一次，然后设置流速，平衡色谱柱30-60min。三、编辑仪器方法和方法组:1．打开电脑双击桌面上的Empower，输入用户名system、密码manager选择项目和系统。2．新建方法与方法组新建方法：单击监视区方法组编辑向导—新建—2695的参数：单次输送体积（建议130）、针头深度0、脱气设置开、泵模式（等度/梯度）、柱温。2489配置：通用（灯开启、波长）—文件—另存为（输入方法名XX）-保存-退出。新建方法组：选择所需的方法名称，点击下一步—输入方法组名（与方法名一致）。四、进样：1．待“监视基线”稳定后，点击“中断样品组”开关，进入“进样”阶段。2．当进行单进样时，

5、在“运行样品”的“单进样”界面中输入“样品名”“功能”“方法组”“进样体积”“运行时间”等；“单进样”就是单次进样，完成分析后即停止检测（流动相正常走动）；3．当多进样时，在“运行样品”的“样品”界面点击“样品瓶”输入所有样品分别所在位置（输入所在编号），“进样体积”、“进样数”、“功能”、“方法组”、“运行时间”等。4．开启绿色“运行”－“运行样品”开关。五、关机：1．清洗注射器、针、柱塞杆：方法同开机平衡系统中的4-7。如果流动相中含有盐类，则实验结束后必须用水清洗柱塞杆。2．如果流动相使用了盐，注意不要让有机溶剂直接和缓冲盐接触，中间要使用水过渡一下。先用水/甲醇（或乙腈）=95

6、/5在1ml/min流速下清洗色谱柱和系统30分钟，再用甲醇或乙腈清洗30分钟；如果流动相中没有使用盐，则用甲醇或乙腈清洗色谱柱和系统30分钟。3．降低流速至0，待系统压力回零后，退出Empower软件系统，关闭HPLC系统。最后，关闭计算机及显示器电源。六、仪器使用注意事项:1．水性流动相使用不要超过二天，最好每天新鲜配制以免微生物的生长。2．样品组方法里的“功能”一项，有“平衡”及“平衡色谱柱”两个选项，其功能不同。若仪器方法选用梯度，用“平衡色谱柱”可以在进样前运行梯度来平衡柱子；而如果选用“平衡”则只是按照初始梯度条件等度平衡柱子。（当然，如果用等度的流动相条件，则两者没有区别

7、）。3．清洗柱塞杆的溶剂可以用水，或5%-10%甲醇（抑菌）。4．清洗针的溶剂可以根据样品溶解性选择，如甲醇，或异丙醇-水（1：1）。5．“实验结束后要注射器排气泡及清洗（purgeinjector）”，1次即可，包括了“purgesampleloop”。6．在线脱气机打开后，开始时运行加速，压力很快降到1.0psi以下，然后维持0.5psi左右。7．怀疑管路堵塞可卸下单向阀和在线过滤器进行清洗。单向阀安装注意方向（箭头朝上）。8．注射器中的气