浓缩胶分离胶-配方.docx

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1、不连续胶的配置2017.8.1810%SDS-PAGE(mL)水1.945.97.99.911.915.930%Acr-Bis1.73.356.78.31013.31.5MTris(PH8.8)1.32.53.856.37.51010%SDS0.050.10.150.20.250.30.410%APS0.050.10.150.20.250.30.4TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.016总体积5.00210.00415.00620.00825.0130.01240.01612%SDS-PAGE水1.63.34.96.68.29.913.23

2、0%Acr-Bis24681012161.5MTris(PH8.8)1.32.53.856.37.51010%SDS0.050.10.150.20.250.30.410%APS0.050.10.150.20.250.30.4TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.016浓缩胶（mL）胶数量1块2块4块6块水1.723.356.71030%聚丙烯酰胺溶液0.51.0231.0mol/LTris(PH6.8)0.761.534.510%SDS0.030.060.120.1810%过硫酸铵（APS）0.030.060.120.18TEMED0.0030

3、.0060.0120.018总体积3.0435.97611.95217.878配胶操作步骤：⑴配胶准备：将玻璃板、梳子有清洁剂或稀酸泡洗，电泳装置用水冲洗并晾干，亦可用酒精棉球擦洗灌胶面晾干，根据厂家说明书安装玻璃板。⑵确定所需凝胶溶液体积，按上表给出的数值在一小烧杯中按所需丙烯酰胺浓度配制一定体积的分离胶溶液。一旦加入TEMED，马上开始聚合，故应立即快速旋动混合物并进入下步操作。(3)灌bio-rad迷你垂直板两块板共约需7.5ml.故实际操作时，我们通常在加AP和TEMED前将上述混合液均分为两份。一份放4度保存，下次用；一份继续加0.075ml的AP和3μl的TEMED

4、，混匀后，立即灌胶。用双蒸水封胶，压平胶面。。留出灌注浓缩胶所需空间(梳子的齿长再加0.5-1cm)。(4)等待过程中，配制浓缩胶溶液，AP和TEMED使用前加入。也可进行样品的准备工作，具体做法在转膜中将又专门讲解。(5)室温约30分钟-40分钟后聚合。倒去双蒸水，再用滤纸吸净残留水。灌浓缩胶，立即将梳子插入玻璃板间，完全聚合需15-20分钟(6)浓缩胶聚合完全后，小心移出梳子。把凝胶固定于电泳装置上，上下槽各加入Tris-甘氨酸电极缓冲液。