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1、李京宝2011.11.25细胞示踪技术与应用(greenfluorescentprotein,GFP)1主要内容GFPGFP的研究历史GFP的应用学习要点基本特性机遇与重视开阔视野2GFP——基本性状3简介绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein)，简称GFP最早是由下村修等人在1962年在水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色荧光。由水晶水母（Aequoreavictoria）中发现的野生型绿色荧光蛋白，395nm和475nm分别是最大和次大的激发波长，它的发射波长的峰点是在509nm4分子结构238aa,单链;二聚体,β-桶状结构;单
2、体：11个β-折叠包围一个α-螺旋；β-桶状结构直径约3nm，高约4nm，规则的氢键带；其末端的短α螺旋以及环状结构一起组成一个单独的致密结构域；5发光机制生色基团附着于α-螺旋上，几乎完美的包被于桶状结构中心。六肽组成的发光中心发光团（三肽）Ser65-Tyr66-Gly67经过环化形成了对羟基苯咪唑啉酮。自身催化环化的结果有氧过程，O2使Tyr66脱氢氧化。6特点GFP荧光极其稳定；中度氧化剂对GFP荧光影响也不大；灵敏度高,抗光漂白能力强；荧光的产生不需要任何外源反应底物。7GFP的研究历史——从下村修到钱永健8TheNobelPrizeinChemistry2008"forthedi
3、scoveryanddevelopmentofthegreenfluorescentprotein,GFP"OsamuShimomuraMartinChalfieRogerY.Tsien钱永健马丁·查尔菲下村脩2008年10月8日9下村脩（1928年8月27日－），有机化学家、海洋生物学家1928年生于日本京都，1960年获得日本名古屋大学有机化学博士学位美国WoodsHole海洋生物学实验室（MBL）波士顿大学医学院名誉退休教授10小海萤（Cypridinahilgendorfii）1955,NagoyaUniversity,laboratoryofProf.YoshimasaHirata
4、.11FridayHarbor,1961.AequoreavictoriaProf.FrankJohnson‘sLab,Princeton,NJ,195912ShimomuraO,JohnsonF,SaigaY(1962)."Extraction,purificationandpropertiesofaequorin,abioluminescentproteinfromtheluminoushydromedusan,Aequorea".JCellCompPhysiol59:223–39水母素aequorinGFP13600ringsperhour（10timesmorethanbyhand.
5、）30–40bucketfulsofjellyfisheachday.1mgofAF-350150mgofpurifiedaequorin50,000jellyfish.2004141974年，纯化到了这个蛋白，时称绿色蛋白、以后称绿色荧光蛋白GFP。同年，荧光共振能量转移(FRET)在生物中发现“荧光素——GFP”1979年，GFP的发色基团确定酶解法151992年，DouglasPrasher拿到了GFP的基因（WoodsHole海洋研究所）"(DouglasPrasher's)workwascriticalandessentialfortheworkwedidinourlab.They
6、could'veeasilygiventheprizetoDouglasandtheothertwoandleftmeout."------MartinChalfie"I'mreallyhappyforthem.Iwasreallysurprisedthatparticulartopiccarriedthatmuchweight."------DouglasPrasher16马丁·查尔菲（MartinChalfie，1947年－），美国科学家成长于美国芝加哥1977年获得美国哈佛大学神经生物学博士学位1982年起任美国哥伦比亚大学生物学教授。17Chalfie,M.,Tu,Y.,Euskir
7、chen,G.,Ward,W.W.,andPrasher,D.C.(1994),“Greenfluorescentproteinasamarkerforgeneexpression,”Science263:802–805.18钱永健RogerYonchienTsien（1952年2月1日－）美国生物化学家美国国家科学院院士美国国家医学院院士美国艺术与科学院院士圣地牙哥加利福尼亚大学生物化学及化学系教授。197
