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1、解放军医学杂志2009年4月1日第34卷第4期MedJChinPLA,Vol.34,No.4,April1,2009·483··综述·液相芯片分析技术及其临床应用林方熊伟(综述)祝庆余(审校)【关键词】液相芯片;检测原理;临床应用3液相芯片技术的临床应用【中国图书资料分类号】R446139【文献标识码】A311液相基因芯片液相基因芯片是将预先人工合成的寡核【文章编号】057727402(2009)0420483202苷酸探针共价连接于微珠表面构成。液相基因芯片除具有一般随着分子生物学技术的不断发展,人们对基因与蛋白的探
2、固相基因芯片的功能如核苷酸测序、单核苷酸多态性分析、基因索和认识逐渐深入,多种新型的高通量检测技术应运而生。液作图等,还具有精确的同时定性、定量分析特征。目前,在液相相芯片检测技术又称多功能悬浮点阵,是20世纪90年代中期基因芯片的研发上,国内外学者都获得了大量成果。国内学者美国Luminex公司开发的芯片技术。它将流式检测与芯片技术[1]朱海红等运用该技术对腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、流感病有机地结合在一起,大大延伸了流式的检测平台,以微球体代替毒等56种病毒进行高通量检测取得了良好效果。加拿大学者[2]细胞作为反应
3、载体,在这个开放的反应体系中可以进行蛋白、核Mahony等成功采用液相基因芯片技术检测了20种人类呼吸[3]酸等生物大分子的检测。液相芯片具有重复性好、高通量、灵活道病毒。美国学者Hindson等采用该技术检测引发手足口病性好、灵敏度高、操作简便、耗时短、成本较低等优点。在临床应的一系列病毒,获得了良好结果。除了检测病毒,近年来也有学用中具有广阔的前景。本文就液相芯片技术的技术原理、检测者采用液相基因芯片进行细菌和真菌临床鉴定。Wiesinger2[4]方法、发展现状和临床应用做一综述。Mayr等使用液相基因芯片技术对
4、临床血液样本中革兰阳性球菌、常见肠杆菌、非发酵菌、念珠菌等25种病原微生物进行鉴1液相芯片的技术原理定,显现出良好的特异性和敏感性。当前,国内外已研发成功了一系列病原微生物和遗传病检测试剂盒并已成功地应用于临与固相生物芯片不同,液相芯片是利用聚苯乙烯所制的微[5]床。国内研发的基于液相基因芯片技术的优普生MASATM球,包覆不同比例的红光及红外光发色剂,从而制成100种不同唐氏筛查等检测试剂盒,现已广泛用于临床产前优生检测。比例颜色的微珠,每颗微珠直径约516μm。这些微珠可根据免312液相蛋白芯片液相蛋白芯片临床检测
5、包括:①抗原抗体疫分析、核酸研究、酶分析、受体和配体识别分析等研究目的的[6]定量定性检测:Yan等建立了微球免疫检测方法进行流感病不同,标定特定抗体、核酸探针与各种受体探针。为了区别不同毒检测和分型,并与ELISA方法比较,结果表明微球免疫法对探针,每一种用于标记探针的微珠都带有一个独特的色彩编号。流感病毒粒子和重组血凝素抗原的检测敏感性均提高了10倍。待测标本则以不同颜色的发色剂标记,并将标记探针的微珠与Wong等[7]建立了微球免疫方法,可以快速检测西尼罗病毒待测物在96孔板上进行反应。反应后,仪器自动吸取反应液
6、并(WestNilevirus),并能与登革热病毒感染、圣路易斯脑炎(St.通过微细管检测通道,每次仅允许一个微珠通过检测通信道,检Lousisencephalitis)病毒感染通过flavivirus免疫鉴别开。Biagini测通信道中设有两束激光,一束为红色,一束为绿色。红色激光[8]等应用液相蛋白芯片技术检测人群血样中抗炭疽IgG抗体,激发微珠基质中的颜色,并根据微珠的不同编号进行分类,以定并与ELISA方法相比较,结果表明前者更加敏感和快速,且稳[9]性检测。绿色激光则可激发携有发色剂的待测样本的颜色,当定性好
7、,样品用量少,检测动力学范围广。Biagini等还建立了待测样本中存在检测目的物时,就会与待定微珠的探针吸附在液相蛋白芯片方法,可以同时检测血清中23种血清型的肺炎球[10]一起,两道激光激发的光都可被检测到。若样本中不含有与该菌荚膜多糖抗体。Go等用液相芯片检测马血清中的马动脉探针匹配的检测目的物时,则只能检测到微珠中的激发光。应炎病毒结构蛋白抗体,并与病毒中和实验比较,结果表明该方法用计算机自动统计分析两道激光所激发的微珠种类与计量,就更加可靠准确。②细胞因子检测:细胞因子的检测是评价免疫功能的一个重要指标。目前,
8、较为成熟的检测方法是ELSLA,可以判定待测样本中有几种测试目标物,进而得知测试样本中虽然该法灵敏度、特异性和准确性较好,但同时对多个细胞因子有无待测目的物存在。进行检测时操作费时费力。液相芯片技术恰恰弥补了该技术的2液相芯片技术的优势不足,可以自行选择需检测的细胞因子的种类和数量,可以在短时间内用微量标本对多种细胞因子/趋化因子
