基于液相色谱-质谱联用技术的紫杉醇分析方法及其临床应用的研究

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1、基于液相色谱-质谱联用技术的紫杉醇分析方法及其临床应用的研究AnalysisofPaclitaxelbyliquidchromatography-massspectrometryanditsApplicationsinClinicalResearch院系：药学院专业：药物分析学姓名：钱隽指导教师：郁韵秋教授完成日期:2012年3月30日目录mmiABSTRACT3■w-rHUm5第一章基于LC-MS法定量分析人血浆中的紫杉醇71弓丨W72实验部分82.1仪器82.2药品与试剂82.3标准溶液与质控样品的配制82.4血浆样品预处理92.5

2、色谱条件92.6质谱条件103结果与讨论103.1质谱条件的优化103.2色谱条件的优化113.3样品预处理方法的选择123.4LC-MS法定量分析人血浆中紫杉醇的方法学验证123.4.1特异性123.4.2线性范围和定量下限133.4.3精密度与准确度133.4.4基质效应与提取回收率143.4.5稳定性143.4.6稀释试验153.5LC-MS分析方法在临床试验中的应用154本章小结17第二章基于LC-MS/MS法分析人血浆中的紫杉醇191弓IW192实验部分202.1仪器202.2药品与试剂202.3标准溶液

3、与质控样品的配制202.4标准溶液的质谱直接进样分析222.5标准溶液的LC-MS/MS分析232.6人血浆中紫杉醇的LC-MS/MS定量分析232.7人血浆中紫杉醇代谢物的液相色谱-质谱联用分析233结果与讨论243.1标准溶液直接进样的ESI-MS和ESI-MS/MS分析243.1.1一级质谱研究243.1.2二级质谱研究273.2标准溶液色谱进样的LC-ESI-MS/MS分析303.2.1流动相的比例优化303.2.2流动相中的添加剂对紫杉醇离子化的影响333.2.3离子对的选择353.3LC-MS/MS法定量分析人血浆中紫杉

4、醇的方法学验证353.3.1特异性353.3.2线性范围和定量下限363.3.3精密度与准确度363.3.4基质效应与提取回收率383.3.5稳定性383.3.6稀释试验393.4LC-MS/MS分析方法在临床试验中的应用393.4.1受试者血样中紫杉醇的浓度测定393.4.2临床药代动力学研究403.4.3代谢物研究4124本章小结43参考文献45第三章综述：流动相中的添加剂对LC-ESI/MS离子化的影响491.弓丨W492.电喷雾离子化的过程493.流动相中的添加剂503.1.pH513.2.添加剂的浓度52

5、3.3.离子对试剂533.4.加合物的形成533.5.加合物形成对紫杉烷类定量分析的影响55参考文献56附录攻读硕士学位期间以第一作者撰写的论文64gt653基于液相色谱-质谱联用技术的紫杉醇分析方法及其临床应用的研究摘要紫杉醇是临床上常用的紫杉烷类抗癌药物。然而，紫杉烷类药物具有强疏水性，临床使用时需用多种药用溶媒增溶，使药物的疗效和安全性受到影响。开发高效低毒的紫杉醇新型制剂已成为近年来国内外研究的热点，由此也引发了对于紫杉醇在定性、定量测定以及代谢物分析等方面的各种需求。本课题分别以液相色谱-质谱联用（LC-MS)和液相色谱-串联质谱(LC

6、-MS/MS)为技术平台，对人血浆中紫杉醇的分析方法进行了研究。经方法优化，建立了灵敏度高、特异性好的定量分析方法，并进行了方法验证。LC-MS法釆用液液萃取法进行血浆样品预处理，提取液为叔丁基甲醚，内标选用炔诺酮。色谱柱为ZorbaxSB-Cig柱（100mmx2.1mm,3.5(im,Agilent)，流动相为甲醇-0.2mmol/L甲酸铵溶液（包含0.1%甲酸），梯度洗脱。在ESr源正离子模式下，选择离子监测（SIM)的目标离子为紫杉醇的[M+Na]+w々876.5和内标的[M+H]+w/z299.4。方法学验证表明本方法的灵敏度高、特异性好，线性范围是1.

7、0-400ng/mL(r>0.998),最低定量限为1.0ng/mL，无明显基质效应，方法的日内和日间精密度都小于8.8%，准确度在±6.8%以内，可以满足药代动力学研究的要求。此方法已成功应用于紫杉醇脂质体注射液在患者体内的药动学研究。LC-MS/MS法定量方法中内标选用多西紫杉醇，色谱柱为ShimpackXR-ODS柱（75mmx3.0mm,2.2pm，Shimadzu)，流动相为甲醇：1.0mmol/L甲酸铵溶液(73/27,v/v),等度洗脱。在ESI源正离子模式下，多反应监测（MRM)的离子对为紫杉醇m/z854.2—286.1和内标m/z808.2—2

8、26.0。