实验八维生素B1片含量测定的方法验证课件.ppt

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1、实验八维生素B1片含量测定的方法验证设计性实验实验原理维生素B1又称盐酸硫胺（thiaminehydrochloride），化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)-甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐性质溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶硫色素反应：紫外吸收特性：Amax=246nm与生物碱沉淀试剂反应氯化物特性：特征性鉴别含量测定氯化物检查原理特征性鉴别——硫色素反应维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现于酸中消失的蓝色荧光。（见刘

2、文英主编《药物分析》第六版，P258）含量测定维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，实验方法鉴别反应取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱使成碱性，则荧光复现。含量测定精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置100ml量瓶中→加盐酸溶液（9→1000）约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀→干燥滤纸过滤→精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶

3、中，共2份，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀→测A246，用吸光系数计算浓度。如何计算出所需要的量？稀释倍数？实验内容与要求鉴别试验吸收波长选择精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算RSD%重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）计算标示量%，计算RSD%稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算RSD%加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样回收率试验含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。如何引用？线性关系和范围分析方法的验证1精密度试验2重现性试验3加样回收试验4稳定性试验5线性

4、与范围目的范围：达到一定精密度、准确度和线性、测定方法适用的高低限浓度或量的区间线性：测试结果与试样中被测物的浓度或量直接呈正比关系的程度要求至少5份系列浓度的对照品溶液，高、低浓度之间要有明显差距，最好能有一定的比例关系。线性相关系数符合规定，如UV-Vis法，r>0.99；HPLC法，r>0.999列出回归方程、相关系数和线性图线性关系考察(示例）序号12345浓度（mg/ml）0.012500.025000.037500.050000.06250测定值0.2360.3360.4360.5360.636精密度试验目的

5、检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度要求用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要在线性范围内RSD<2.0%……仪器分析精密度试验（示例）实验序号信号值平均值RSD10.5120.5100.2%(<2.0%)20.50830.51140.50950.51060.509重现性试验目的考察样品溶液制备方法的可靠程度要求同批样品按相同方法制备样品溶液，至少6份,浓度与信号值均要在线性范围内RSD<2.0%……仪器分析重现性试验(示例)试验序号称样量（g）测定值（mg）含量（m

6、g/g）平均含量（mg/g）RSD（%）10.166622.04132.29134.530.3%<2.0%20.166724.82148.8930.166921.90131.2240.174223.54135.1350.166720.86125.136………稳定性试验目的：考察样品溶液制备后多少时间内稳定要求要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60min时间点分别测定样品的A246；在0、1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积。RSD<2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定；RSD>2.0%，则需要重新

7、选取时间点进行计算，直到RSD<2.0%，否则要尽快测定同批、同法序号时间(min)信号值平均信号值RSD（%）RSD（%）100.5050.507(<2.0%)(>2.0%)2150.5073300.5094450.5135600.5256900.54871200.567稳定性试验(示例)加样回收率试验目的考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度要求设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率RSD<2.0%加样回收试验序号称样量（g）待测组分含量（mg）对照品加入量（

8、mg）测得量（mg）回收率（%）平均加样回收率（%）RSD（%）10.1665.2820.250015.027.2100.130.251240.250953.0450.250015.029.898.660.250070.250442.8480.250015.033.1100.090.2510取含量测定时一半的称样量，