紫外可见分光光度计的简单原理课件.ppt

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1、普析通用紫外/可见分光光度计技术讲座中南大学现代分析测试中心邓世林内容提要第一篇原理及应用领域第二篇常用测定方法第三篇影响仪器质量的几个重要指标第一篇紫外/可见分光光度计的原理及应用领域光的选择吸收当一束光照射到某种物质的固态物或溶液上时，一部分光会被吸收或被反射，不同的物质对于照射它们的光束的吸收程度是不同的，对某个波长的光吸收强烈，对另外波长的光吸收很小或不吸收，我们把这种现象称为光的选择吸收。物质呈现出特征的颜色，就是它们对可见光中某些特定波长的光线选择吸收的缘故。一切物质都会对可见和不可见光中的某些波长的光进行吸收物质颜色和吸收光颜色的

2、关系吸收光物质颜色颜色波长(nm)黄绿紫400~450黄蓝450~480橙绿蓝480~490红蓝绿490~500紫红绿500~560紫黄绿560~580蓝黄580~600绿蓝绿600~650蓝绿红650~750电磁波谱图0.01nm0.1nm800nm10µm500µm1cm波长200nm400nm2.5µm25µm1m光谱可区域见γ射线χ射线紫外光光红外光微波无线电波分析分光方法χ射线光度核磁共振γ射线光谱法光谱法紫外光谱法法红外光谱法微波光谱法光谱法1m=104µm=106nm=109ǺUV/VIS/N

3、IR光照射到物质上入射光I0透射光I光程长光源透射率T=I0I检测器朗伯定律（1760年）：物质对光的吸收与物质厚度成正比:A=f(b)比耳定律（1852年）：物质对光的吸收与物质浓度成正比:A=f(c)紫外/可见分光光度计的简单原理：LAMBERT-BEER定律此处T:透射率e:摩尔消光系数l:光程长C:浓度吸收A=log=eCl1T当一束平行的单色光通过某一均匀溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的长度的乘积成正比。成立条件：①单色光②稀溶液A=log—=-logT=eCl=abc吸光度、透过率与浓度的关系（波长、吸收池光程一定）%T浓度1T应

4、用领域：涉及化学化工、医疗卫生、冶金地质、食品饮料、农业化肥、畜牧水产、机械制造、计量科学、环保、制药、生物、材料、石油等领域中的科研、教学、生产中的质量控制、原材料和产品检验等各个方面，进行定性分析、定量测定、纯度检查、结构分析、络合物组成及稳定常数测定、动力学研究等等。目前，紫外可见分光光度计已成为全世界历史最优久、使用最多、覆盖面最广的常规分析仪器。测定范围：几乎所有的无机元素和在紫外及可见光区有特征吸收的有机物或有机化合物都能用紫外/可见分光光度法进行测定。紫外/可见分光光度计的基本结构光源单色器样品室检测器控制放大电路显示器比色皿光电管（或

5、光电池）放大器单色光显示器单光束紫外/可见分光光度计斩光器单色光光电管（或光电池）放大器反光镜双光束紫外/可见分光光度计比色皿光电管（或光电池）斩光器放大器单色光显示器光电管（或光电池）准双光束紫外/可见分光光度计S1准直镜切尼尔-特纳G单色器结构S2准直镜第二篇紫外/可见分光光度测定的一般方法（一）定量分析一、绝对法基于朗伯-比尔定律A=ebC，当某一物质在一定波长下e（吸收系数，可由已知浓度样品通过测量、计算求得）为一常数，比色皿的光程也是已知，也是一个常数，只要在吸收系数指定的波长处测定样品溶液的吸光度值(OD值)，然后由下式求得该样品溶液的浓

6、度或含量：C=A/eb二、标准对照法在同样条件下，在选定的波长处，分别测定已知浓度标准溶液的吸光度值A标和样品溶液的吸光度值A样，然后由下式求得样品溶液的浓度或含量：C样=A样A标C标三、标准曲线法（包括K因数法）最常用的定量分析方法。即在一定波长（λmax）下测定某物质的标准系列溶液的吸光度作校正曲线，然后测定样品溶液的吸光度值，由校正曲线求得样品溶液的浓度或含量。所配置的标准系列溶液的吸光度应在0.11.5Abs范围内，吸收测定的精密度可达0.5%。注意：UV/Vis的最低检测浓度与吸收系数、仪器噪声、基线平直度、光谱带宽有关。而最高检测

7、浓度则与吸收系数、仪器的杂散光、光谱带宽等有关，吸收系数与光谱带宽有关。杂散光越小，检测上限越高。四、双波长法标准溶液澄清透明，待测样品浑浊或含有一种与吸收峰临近的干扰成分，对待测成分主吸收波长的吸光度有叠加影响，干扰成分随待测成分浓度变化或无法将干扰成分加入标准溶液中，则必须用双波长法扣除这种干扰成分对待测成分吸光度读数的影响。双波长法是以样品溶液本身作参比，用两束单色光λ1和λ2交替照射到同一样品溶液上，仪器自动求得吸光度差值∆A，在一定范围内∆A与溶液浓度成正比，待测样品与标准溶液在同样条件下测定即可定量。双波长法可消除样品溶液的浑浊背景、色度

8、背景，排除临近吸收峰的干扰（包括二波长法、等吸收点法和系数倍率法）。λ1λ2λ1λ2如：核酸（DNA、RNA