大鼠免疫球蛋白EIgEELISA试剂盒.doc

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1、大鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和生物体液内)本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗大鼠IgE单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的IgE与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠IgE，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，IgE浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中IgE浓度。酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12

2、ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：250ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml第一抗体工作液（BiotinylatedAntibod）y12ml终止液（StopSolution）12ml1.收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。所有标本测定前用标本稀释液至少作1：20稀释（取10u

3、l，加标本稀释液190ul,稀释20倍）。2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成500ng/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液200ul。在第一管中加入500ng/ml的标准品溶液200ul混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出200ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100

4、ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、3.9、0n

5、g/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应IgE含量，再乘上稀释倍数即可。1.灵敏度：最小的IgE检测浓度小于2ng/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的大鼠IgE。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于10.6％。1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。1.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。o2.本试剂盒宜置4C冰箱保存。3.本试剂盒

6、仅用于科研，不能用于临床诊断！