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时间:2017-11-25
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1、人免疫球蛋白IgG使用说明书产品编号:本试剂盒仅供科研使用,不得用于临床及诊断使用!试剂组成名称规格数量保存包被平底微孔板96孔1可拆卸板2-8℃密封冷藏酶结合物6毫升1瓶2-8℃冷藏标准品1毫升6瓶2-8℃冷藏显色剂A6毫升1瓶2-8℃冷藏显色剂B6毫升1瓶2-8℃避光冷藏终止液6毫升1瓶2-8℃冷藏浓缩洗涤液(100倍10毫升1瓶2-8℃冷藏稀释)使用说明书1份自备物品1.酶标仪(尽量提前预热)2.微量加液器、吸头3.蒸馏水或去离子水以及滤纸操作步骤1.取出试剂盒,于室温(20-25℃)放置15-
2、30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。2.取出酶标板,按照标准品的次序分别加入100μl的标准品溶液于空白微孔中。3.空白微孔中加入100μl的样品,空白对照加入100μl的蒸馏水;4.在各孔中加入50μl的酶标记溶液;(不含空白对照孔)5.将酶标板用封口胶密封后,37℃孵育反应1小时;(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)6.充分清洗酶标板3-5次,保持各孔有充足的水压;(浓缩洗涤液以1:100的比例与蒸馏水稀释)7.酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干;8.各孔加入显色剂A、B液各50μ;l(不含
3、空白对照孔)9.20-25℃下避光反应15分钟;10.各孔加入50μl终止液,终止反应;结果判断1.30分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值;2.百分结合率计算:设S0管计数为B0,各标准管或样品管计数为B,非特异管计数为NSB,则百分结合率计算公式如下:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%3.logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)4.将标准品的OD均值与标准品0点的OD均相除,为标准点的百分结合率,在lo
4、g-logit坐标纸上绘图。5.Log-logit双对数标准曲线:坐标纸上横轴从左至右第一个1-9表示为第一个10进位,第二个1-9表示为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。坐标纸纵轴为百分比(1-99),即各标准吸光值的百分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上,同时剩余的点均匀分布在直线的两边。样品也同样由吸光值计算百分结合率,再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点,此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度,无须换算。6.人工处理:以标准浓度取log值为横坐标,对应的logit
5、值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横1坐标,对应的B/B0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线(理想化时是一条直线)。根据待测样品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。如果使用普通坐标纸,查出的数值应取反对数才是最后的浓度值。7.自动处理:使用logit-log或四参数数据处理模式,由电脑自动计算得出结果。8.敏感度:1.0ng/ml;9.图例2www.bgswkj.comHumanimmunoglobulinGELISAKit96TestsCatalogueNumber:HEI0
6、18Storeallreagentsat2-8°CFORLABORATORYRESEARCHUSEONLY.NOTFORTHERAPEUTICORDIAGNOSTICAPPLICATIONS!PLEASEREADTHROUGHENTIREPROCEDUREBEFOREBEGINNING!INTENDEDUSEThisBOGOOIGGELISAkitisintendedLaboratoryforResearchuseonlyandisnotforuseindiagnosticortherapeuticp
7、rocedures.TheStopSolutionchangesthecolorfrombluetoyellowandtheintensityofthecolorismeasuredat450nmusingaspectrophotometer.InordertomeasuretheconcentrationofIGGinthesample,thisIGGELISAKitincludesasetofcalibrationstandards.Thecalibrationstandardsareassaye
8、datthesametimeasthesamplesandallowtheoperatortoproduceastandardcurveofOpticalDensityversusIGGconcentration.TheconcentrationofIGGinthesamplesisthendeterminedbycomparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.PRINCIPLEOFTHEASSAYTheco
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