显微镜的使用及维护课件.ppt

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1、实验一普通光学显微镜的使用与维护ALEX前言显微镜是一种高精密的仪器,目前已广泛应用于生命科学、材料科学、医学等学科领域。第一代为光学显微镜，第二代为电子显微镜，第三代为扫描隧道显微镜。9/17/2021光学显微镜电子显微镜扫描隧道显微镜9/17/2021一、实验目的1.掌握显微镜的正确使用2.熟悉显微镜的工作原理、基本结构、性能参数3.了解显微镜的拆装技术和主要性能参数的设定9/17/2021二、显微镜1.光学显微镜的成像原理要获得清晰的像，被观察标本AB应位于物镜前焦点外至两倍焦距之间。标本AB经两级放大

2、，在眼的明视范围内看到放大的A``B``像。9/17/20212、普通光学显微镜的结构普通显微镜在结构上分：光学系统，机械系统。光学系统包括物镜、目镜、聚光镜、反光镜等。机械系统包括底座、镜臂粗调手轮、微调手轮、载物台、转换器等。9/17/20211.物镜显微镜光学系统最核心的部件，其性能直接关系到显微镜的性能和成像质量。显微镜的光学系统9/17/20212.目镜也称接目镜，实质上是放大镜，其作用是把物镜分辨和放大的实像再放大并映入观察者眼中。显微镜的光学系统9/17/2021聚光镜光源(灯在底座内)3.光源

3、4.聚光镜显微镜的光学系统9/17/2021聚光镜孔径光阑9/17/2021物镜转换器载物台调节手轮单目镜镜筒物镜转换器显微镜的机械系统9/17/2021聚光器升降螺旋玻片夹调焦螺旋调焦螺旋锁显微镜的机械系统9/17/20213、普通光学显微镜的正确使用（1）.显微镜取镜放置：①移取时右手握住镜臂，左手托住镜座，保持显微镜平直②显微镜放置在稳定的台面上，离台边一定距离（6cm以上）③正确连接接地良好的电源。9/17/2021将主开关打开，调节亮度将样品置于载物台，移入光路以转换器使低倍物镜入光路转动调焦旋钮，

4、对样本聚焦调节目镜瞳间距和屈光度调节孔径光阑和视场光阑将观察物镜转入光路，再聚焦再次调节亮度，开始观察（2）.普通光学显微镜的基本观察步骤3、普通光学显微镜的正确使用9/17/20213、普通光学显微镜的正确使用（3）.清洁收镜：①观察完毕，移去标本，扭转转换器，使两低倍物镜镜头呈V字形于载物台上方②用擦镜纸擦净油镜镜头，绸布擦拭镜身③是有张力的部件处于松弛状态（聚光镜、载物台）④调节光亮度旋钮将光亮度调至最暗，关闭电源。9/17/2021（1）.数值孔径4、显微镜的性能参数又称镜口率，是物体与物镜间媒质的折

5、射率n与物镜孔径角的一半（β）正弦值的乘积，用NA表示。即：NA＝n×sinβ数值孔径与分辨率成正比，与放大率成正比，NA增大，视场宽度与工作距离都会相应地变小。9/17/2021（2）.放大倍数又称为放大率，指显微镜经多次成像后最终所观察到的物像大小相对于原物体大小的比值，常记作M。即：M＝maqm是物镜的放大倍数a为目镜的放大倍率q是在双目显微镜中所增设的棱镜产生的放大倍数（双目显微镜取值为1.6倍，单目显微镜q值为1）。9/17/2021物镜一般刻有放大倍数×NA（数值孔径）如：4×0.1（1组镜片）1

6、0×0.25（2组镜片）40×0.65（3组镜片）100×1.25（4组镜片）160/0.17（机械镜筒长/盖玻片的厚度）9/17/2021（3）.工作距离指显微镜正常观察物像时物镜表面到被观察标本间的距离显微镜使用过程中习惯所说的“调焦”指的就是调整物镜的工作距离它与物镜的数值孔径成反比，一般情况下，物镜的数值孔径越大，其工作距离越小。9/17/2021（4）.视野视野又称视场，是指通过显微镜所能看到的标本范围。视野成圆形视野大小决定于物镜的倍数及目镜光阑的大小，小的放大倍数和大光阑可获得较大的视野，反之则

7、视野较小因为视野的局限，一般均要通过机械装置移动、分区观察标本。9/17/2021（5）.景深又称焦点深度，是指在成一幅清晰物像的前提下，像平面不变，景物沿光轴前后移动的距离显微镜观察时，不仅位于聚焦平面上的点是清楚的，而且在景深范围内的各点也是清楚的景深与总放大倍数及物镜的分辨率成反比（垂直鉴别能力）9/17/2021三、实验器材1.普通光学显微镜一台2.红细胞悬液3.骨髓片4.微量吸管、一次性塑料吸管等9/17/2021四、操作步骤1、显微镜光学系统的拆卸和组装（仅示教）拆卸：拆的次序是由下而上，即先拆光

8、源、后拆聚光镜、物镜、目镜组装：装的次序是由上而下，即先目镜、后物镜、聚光镜、光源2、普通光学显微镜的调试3、显微镜光学性能参数的设定4、正确使用光学显微镜观察不染色标本和染色标本，并总结其不同之处（不染色标本制备：用微量吸管吸取EDTA抗凝血20ul，加入到5ml生理盐水中，混匀，用一次性塑料吸管滴加3-5滴与洁净玻片上）9/17/2021五、注意事项1.转换物镜时须旋转转换器，勿转物镜，否则易损