白细胞抗原系统检测教程文件.ppt

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1、第四章白细胞抗原检测严力行目录第一节HLA血清学检测HLA抗原检测HLA抗体检测第二节HLA细胞学检测第三节HLA分子生物学检测HLA的分子生物学检测方法HLA常见基因分型方法比较HLA分型模棱两可结果的原因及其对策第四节粒细胞抗原抗体检测重点提示HLA抗原检测掌握微量淋巴细胞毒实验的原理及其影响因素HLA抗体检测方法淋巴细胞毒方法流式细胞仪方法ELISA方法Luminex检测技术掌握不同方法的原理及其优缺点微量淋巴细胞毒试验HLA抗原的血清学分型方法用一系列已知的抗HLA标准分型血清来检测未知淋巴细胞表面的HLA抗原型别微量淋巴细胞毒实验原理基于抗原抗体反应抗原抗体免疫复合物在补体的

2、作用破坏细胞膜利用染料或其它方法鉴定和区分死活细胞计分法：NIH计分法HLA抗血清的来源HLA抗体血清来源同种免疫刺激产生HLA同种抗体HLA抗原免疫刺激动物杂交瘤技术人群存在的天然抗体微量淋巴细胞毒试验的影响因素HLA抗血清抗血清来源和抗体种类、抗血清效价、抗血清特性、抗血清质量淋巴细胞淋巴细胞活性、淋巴细胞纯度、淋巴细胞数量、淋巴细胞上抗原表达异常孵育时间和温度补体活性染色和固定时间血清学抗原分型方法评价血清学方法抗原分型检测HLA-Ⅰ类和Ⅱ类抗原检测HLA-Ⅰ类抗原相对容易检测HLA-Ⅱ类抗原需要分离和纯化Ｂ淋巴细胞易受多种因素影响其错误率相对较高HLA血清学某一座位上只能检测到

3、一个抗原，而基因分型存在两个不同等位基因，应考虑到无效等位基因HLA抗体检测补体依赖的淋巴细胞毒方法（CDC）采用淋巴细胞作为靶细胞抗原易受多种因素影响，检测敏感性最低ELISA方法ELISA方法能检测HLA-I和HLA-II抗体流式细胞术采用淋巴细胞作为靶细胞抗原结合荧光检测技术特点Luminex检测技术结合荧光流式细胞仪和免疫标记技术可区分HLA-I和HLA-II抗体可鉴定抗体的属性和强度HLA抗体检测Luminex检测技术以包被抗原的微球磁珠作为靶细胞每种磁珠上包被一种抗原多种磁珠可以在同一体系内反应待测血清与磁珠孵育存在HLA抗体时，形成抗原-抗体复合物加入荧光标记的抗人IgG

4、抗体形成抗原-抗体-荧光标记抗体复合物Luminex仪测定微球磁珠上的荧光值判定HLA抗体的强度和特异性微球磁珠荧光值大小每种磁珠的反应特性第二节HLA细胞学检测重点提示掌握下列方法的基本原理及其应用混合细胞培养方法（mixedlymphocyteculture，MLC）纯合分型细胞（homozygotetypingcell,HTC）预致敏淋巴细胞试验（primedlymphocytetest,PLT）混合淋巴细胞培养混合淋巴细胞培养（MLC）二个无关个体的淋巴细胞在体外混合一起培养二者组织相容性抗原不同，互相刺激对方的T细胞发生增殖增殖反应强度与组织相容性抗原的差异程度成正比转化的淋

5、巴母细胞表现为细胞体积增大、核内DNA和RNA合成增加MLC用于HLA-D抗原分型实体器官移植前的快速相容性检测分为双向MLC和单向MLC混合淋巴细胞培养双向MLC双方的淋巴细胞互相刺激而增生、转化，即双方的淋巴细胞既是刺激细胞，又是反应细胞抗原相同或相容，则刺激作用很小，细胞无变化抗原不相容，则刺激作用大，细胞被活化并产生增殖单向MLC一方的淋巴细胞用X线照射或用丝裂霉素C处理丧失增殖反应能力而仍保留其抗原刺激效应MLC只有一方淋巴细胞发生增殖反应，故可了解单一个体淋巴细胞的刺激强度和应答程度纯合细胞分型方法纯合细胞分型方法（也称为阴性分型）已知HLA-Dw型别的经灭活的纯合子细胞作

6、为刺激细胞待检细胞作为反应细胞两种细胞进行单向混合淋巴细胞培养若不发生或仅发生弱的增殖反应表明受检细胞具有与纯合子分型细胞相同的HLA-Dw型别，它可能为特定HLA-Dw型的纯合子或杂合子发生增殖反应表明受检细胞不具有纯合子细胞拥有的HLA-Dw型别预致敏淋巴细胞（PL）预致敏淋巴细胞（PL）仅对一种单体型具有识别增殖能力，而处于静止状态的小淋巴细胞作为应答细胞参与了初次MLC反应，经过增殖后又回到小淋巴细胞遇到相应抗原刺激后，迅速发生淋巴细胞转化和增殖预致敏淋巴细胞试验预致敏淋巴细胞试验（又称为阳性分型法)PL细胞作为已知的分型细胞待检淋巴细胞作为刺激细胞待检淋巴细胞分别与一系列的预

7、致敏淋巴细胞进行单向MLC待检细胞与预致敏淋巴细胞预先识别的抗原相同，预致敏淋巴细胞会迅速增殖预致敏淋巴细胞分型试验是用阳性反应作为判定标准第三节HLA分子生物学检测重点提示HLA的分子生物学检测方法掌握PCR-SSP、PCR-SSO、Luminex检测技术、基因芯片、PCR-SBT的基本原理掌握HLA常见基因分型方法的特点及其适用范围HLA高分辨分型中模棱两可结果的原因及其对策明确其形成原因掌握4种常见方法的原理及其应用HLA分子生物学检测H