生化检验基础 培训课件.ppt

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1、生化检验基础培训乌拉特前旗蒙中医医院邢海斌2017.11目录一、生化检验分析对象二、生化项目分类三、生化检测原理四、临床生化测定方法和浓度换算五、几个临床生化测试概念一、生化检验的对象血清是指血液凝固析出的淡黄色透明液体。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆最大的区别。其他样本：血浆、尿液、脑脊液等。1.生化检验的对象——血清一、生化检验的对象静脉采血方式离心血样二、生化项目分类肝功能肾功能心肌酶谱血糖胰腺炎血脂痛风免疫性疾病按临床分类二、生化项目分类酶类底物代谢类无机离子类特种蛋白类按化学性质分类三、生化检测原理1

2、.光谱常识三、生化检测原理如把两种光以适当比例混合而产生白光感觉时，则这两种光的颜色互为补色。下图中处于同一直线关系的两种色光（如绿与紫、黄与蓝）互为补色。例如，CuSO4、K2MnO42.互为补色光的概念/nm颜色互补光400-450紫黄绿450-480蓝黄480-490绿蓝橙490-500蓝绿红500-560绿红紫560-580黄绿紫580-610黄蓝610-650橙绿蓝650-760红蓝绿三、生化检测原理为透光率，一般用T表示3.吸光度的定义三、生化检测原理当入射光的波长、溶液的浓度、温度一定时，溶液的吸光度与液体的厚度成正比。4、朗伯定律三、生化检测

3、原理当入射光的波长、液层厚度和溶液的温度固定时,溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。5.比尔定律三、生化检测原理描述为被测物质溶液(均匀非散射)在一定浓度范围内对一定波长单色平行的吸光度与被测物质浓度和溶液厚度的乘积成比。数学式为：其中A为溶液的吸光度，C被测物浓度，L为光径，ε为摩尔吸光系数，单位是L/mol∙cm，指当吸光物质的浓度为1mol/L，吸收池厚为1cm，以一定波长的光通过时，所引起的吸光度值A。ε值取决于入射光的波长和吸光物质的吸光特性，亦受溶剂和温度的影响。显然，显色反应产物的ε值愈大，基于该显色反应的光度测定法的灵敏度就愈高。6.朗伯—比尔定律

4、（Lambert-Beer’sLaw）三、生化检测原理7.吸收曲线三、生化检测原理右图为不同浓度的KMnO4的吸收曲线，可见，不同浓度的KMnO4的吸光度不同，但是吸收峰的波长相同。7.吸收曲线三、生化检测原理8.透射比浊法吸光度的定义朗伯比尔定理的必须条件小结四、临床生化测定方法和浓度换算1、生化试剂与样品中的有效成分发生化学反应，反应后生成一种对光敏感的物质，再通过用特定的光去照射最终化学反应的反应液，接收并检测光线照射前后发光强度变化，从而计算出被测物的浓度信息。比如：ALB（白蛋白）测试，通常情况下我们使用溴甲酚绿这种物质和ALB混合在一起，在酸性条件

5、下，两者就发生化学反应：NAD+-NADH系统p-NP（p-NA）系统H2O2偶联的指示系统抗原抗体反应指示系统其它显色反应2.试剂显色指示系统四、临床生化测定方法和浓度换算终点法动力学法（零级动力学法、连续检测法）固定动力学法（两点法、一级动力学法、初速率法）3.生化测定方法四、临床生化测定方法和浓度换算终点法的定义指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。整个反应达到平衡，由于正向反应的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加(或

6、降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比。终点法对反应条件(如酶量、pH、温度)小的改变不敏感，只要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可。3.生化测定方法——终点法四、临床生化测定方法和浓度换算终点法3.生化测定方法——终点法四、临床生化测定方法和浓度换算零级动力学法定义动力学法即通常所说的零级动力学法，也被称为连续监测法。指反应过程中反应速度维持不变，与底物浓度无关，因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度(△A/min)与被测物的活性或浓度成正比，主要用于

7、酶活性的测定。实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再维持不变，同样，由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定。4.生化测定方法——动力学法四、临床生化测定方法和浓度换算动力学法（零级动力学法、连续检测法）4.生化测定方法——动力学法四、临床生化测定方法和浓度换算固定时间法定义固定时间法又被称为一级动力学法(firstorderkinetic)、初速率法(initialrate)、二点法(twopointrate)等。在一定的反应时

8、间内，反应速度与底物(被测物)浓度的一