行业标准：GBT19423-2003 饲料中尼卡巴嗓的测定高效液相色谱法.pdf

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1、ICS65.120B20中华人民共和国国家标准GB/T19423-2003饲料中尼卡巴嗓的测定高效液相色谱法Determinationofnicarbazininfeed-Highperformanceliquidchromatography八卜2003-12-11发布U2004-06-01实施徽雷嘉矗矗赢森胃发“GB/T19423-2003前言本标准检测方法主要以美国食品药物管理局(FDA)编著的《动物组织及饲料中兽药分析手册》一书中“饲料中尼卡巴嚓的测定方法”为基础，经试验确定本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由全国

2、饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:浙江省饲料监察所。本标准主要起草人:朱聪英、宣士荣、邵庆均、施杏芬、沈琴芳、张志健。GB/T19423-2003饲料中尼卡巴嗓的测定高效液相色谱法范围本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中尼卡巴嗦含量的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中尼卡巴嗦的测定。本方法的最低检测浓度为每千克饲料中尼卡巴嗦含量在1mg以上。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根

3、据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.GB/T6682-1992分析实验室用众规格和试验方洪3原理用二甲基甲酞胺(DMF)提取试样中的尼卡巴嚷，经碱性氧化铝层析柱过柱纯化，浓缩并用洗脱液溶解、定容，用高效液相色谱仪，C,:反相柱，以甲醇溶液为流动相，用紫外检测器在波长365nm条件下进行定量测定。4仪器设备4.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。4243色谱柱:C,:反相柱(粒度5um，柱长10cm，内径4.6mm).4旋转蒸发器。电动振荡器。4.5层析管:1cmX30cm

4、.5试剂和溶液以下所用的试剂和水，除特别注明者外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682-1992中规定的三级水。5.195%乙醇。5.2甲醇:色谱纯。5.3二甲基甲酞胺(DMF),5.4碱性氧化铝:100目一200目，105℃条件下烘2h后放干燥器中备用。5.5洗脱液:95%乙醇(5.1升甲醇(5.2)为95+55.6尼卡巴嚓贮备液:准确称取100mg尼卡巴嗦标准品，用DMF定容至100mL(浓度为1mg/mL).5.7尼卡巴嚼工作液:移取1mL尼卡巴喷贮备液(5.6)，用DMF定量至100ml-(浓度为10ug/mL).5.8流动

5、相:80十20的甲醇水溶液。6试样制备选取有代表性的饲料样品，用四分法缩减至500g，粉碎至过。.45mm孔径的分析筛，混匀，装人密1GB/T19423-2003闭容器。分析步骤7.1试液的制备7.1.1提取准确称取试样log于具塞三角烧瓶中，加二甲基甲酸胺(DMF)50mL，用电动振荡器振播30min,用滤纸干过滤，弃取初滤液，收集滤液，备用7.1.2柱层析纯化7.1.2.1柱的制备在层析管中加人约2邝管高的二甲基甲酞胺(DMF),缓慢加人碱性氧化铝至高度为6cm(约6g),小心排除气泡，静止15min，打开活塞，放下液体，至液面达

6、氧化铝表面，再加25mLDMF洗柱，注意液面不能低于氧化铝表面7.1.2.2纯化准确移取25mL滤液于层析柱中，放下液体，至液面达氧化铝表面，用25mLDMF淋洗柱，弃去淋洗液，加20mL洗脱液，立即洗脱尼卡巴嚓，弃去开始的ImL-3mL洗脱液，注意在以上过程中保持柱不干。收集其余洗脱液于旋转蒸发器烧瓶中，用旋转蒸发器在600C-70℃下蒸发至干，再用洗脱液定容，使其尼卡巴嚓最后浓度为10pg/mL左右，备用。如用其他口径层析管进行层析，则全部试剂按层析管内径平方比改变。7.2尼卡巴臻标准溶液的制备按7.1.2.1制备柱，准确移取25

7、mL尼卡巴嗓工作液，按7.1.2.2操作至“注意在以上过程中保持柱不干”。收集洗脱液于25mL容量瓶中，用洗脱液定容至刻度。7.3测定T3.1高效液相色谱条件7.3.1.1色谱柱:C,，反相柱(粒度5pm，内径4.6mm，柱长10cm),7.3.1.2流动相:甲醇+水(80+20).7.3.1.3流速:1mL/min,7.3.1.4温度:室温。7.3.1.5进样体积,20川一。7.3.1.6检测器:紫外检测器，波长365nm.7.3.2上机测定尼卡巴嚓标准溶液和试液分别注人液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积进行计算。7.4结果的

8、计算与表述7.4.1计算公式结果按(1)式计算:PXGXVX2。.........·..·.··。······⋯⋯(1)P,Xm式中:c—试样中尼卡巴嚓含量，单位为毫克每千克(mg/kg);Cl—标准溶液中尼卡巴1*含量