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《行业标准：GB-T14701-1993 饲料中维生素B2测定方法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国国家标准GB/T14701一93饲料中维生素B:测定方法MethodforthedeterminationofVitaminB2infeeds1主题内容与适用范围本标准规定了饲料中维生素Bz测定方法。本标准适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、维生素预混料中维生素B:的测定。待测液中维生素B，检测浓度为。05^0.2pg/mL.2引用标准GB6682实验室用水规格3方法原理维生素B2(即核黄素CuHzoN,06)在440nm紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内其荧光强度与核黄素浓度成正
2、比。用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光强度之差与内标荧光强度的比值计算祥品核黄素的含最。4试剂和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。4.1盐酸溶液，0.1mol/L:将8.5mL盐酸(GB622)用水稀释至1000mL4.2盐酸溶液，1mol/Lo4.3氢氧化钠(GB629)溶液，1mol/L,4.4冰乙酸(GB676)4.5冰乙酸溶液，0.02mol/L:将1.8mL冰乙酸用水稀释至1000m1。4.6高锰酸钾(GB643)溶液，40g/L,4.7过
3、氧化氢(HG3-1082)溶液,100mL/L。现用现配。4.8核酸素标准溶液4.8.1核黄素贮备液工核黄素(中国药典参照标准)，于五氧化二磷千燥器中干燥24h，称取0.0500g，溶解于。02mol/1乙酸溶液(4.5)中，在蒸汽浴上恒速搅动直至溶解，冷却后稀释至500mLe盛入棕色瓶滴加甲苯覆盖，低温(40C)保存。该溶液每毫升含。.1mg核黄素。4.8.2核黄素贮备液II:取核黄素贮备液1(4.8.1)10mL用。.02mol/L乙酸溶液稀释至100mL，盛于棕色瓶中滴加甲苯覆盖，低温(4C)保存
4、该溶液每毫升中含10Ig核黄素。4.8.3核黄素标准工作液:取核黄素贮备液1(4.8.2)10mL，用水稀释至100mL。现用现配该溶液每毫升中含1Fig核黄素。一.~一一一一一--户一，一~一，.一-州一种一一.一一月一一一-~-国家技术监督局1993一11一06批准1994一06一01实施GB/T14701一934.9荧光素标准溶液4.9.1荧光素贮备液:称取荧光素(Q/HG22-786)0.0500g，用水稀释至1000mL,盛于棕色瓶中，低温(4C)保存该溶液每毫升中含50pg荧光素。4.9.2
5、荧光素标准工作液:取荧光素贮备液(4.9.1)1mL，用水定容至1000mL,盛入棕色瓶中，低温保存。该溶液每毫升中含。.05pg荧讹素。4.10澳钾酚绿pH指示剂:取澳钾酚绿(HGB3386)0.1g，加氢氧化钠溶液(0.05mot/L)2.8mL使之溶解，再加水稀释至200mL。变色范围pH3.6^5.2,4.11连二亚硫酸钠(Na,S,O,)(Q/HG2-001)，防止吸潮。仪器、设备51荧光分光光度计。5253分析天平:感量0.0001go电热恒温水浴。54具塞玻璃刻度试管，15mLe试样的制备
6、采集具有代表性的样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，通过。.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。分析步驻7.1称样:单一饲料、配合饲料、浓缩饲料称取1-2g,精确至。.001g。维生素预混料称取。.25-0.50g，精确至。.0001g，将试样置于100mL容量瓶中。7.2样液的制备:向盛样品的容量瓶中加65mL盐酸溶液(4.1)，于沸水浴中加热30min,开始加热5^-10min时常摇动容量瓶，以防样品结块。或于121-123'C15磅高压釜中加热30min。冷却至室温后，
7、用氢氧化钠溶液(4.3)凋节pH至6.0-6.5，然后立即加稀盐酸溶液(4.2)使pH值约为4.5(澳甲酚绿指示剂变为草绿色)。用水稀释至刻度。通过中速无灰滤纸过滤，弃去最初5^-10mL溶液，收集滤液于100mL锥形瓶中。取整份清液，滴加稀盐酸检查蛋白质如有沉淀生成，继续加氢氧化钠溶液，剧烈振摇，使之沉淀完全稀释到测量体积。对高含量样品，取整分的澄清液，用水稀释至一定体积使含核黄素约为。.1pg/mL(以下操作避免紫外光照射)。7.3杂质氧化:于a,b,c三支15mL刻度试管(5.4)中各吸入样液(7
8、.2)10mL，同时做平行，向试管a,c中各加入1mL蒸馏水，向试管b中加入1mL核黄素工作液(4.8.3)。然后各加人冰乙酸(4.4)1m1，旋摇混匀后逐个加高锰酸钾溶液(4.6)0.5mL,旋摇混匀，静置2min，再逐个加入过氧化氢溶液(4.7)0.5mL旋摇，使高锰酸钾颜色在10s内消退。加盖摇动，使试管中的气体逸尽。7.4测定:用荧光素溶液(4.9.2)调整荧光仪，使其稳定于一定数值，作为仪器工作的固定条件。调整激发波长440nm，
