行业标准：GBT 27529-2011 马接触传染性子宫炎诊断技术.pdf

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1、ICS11．220B41园目中华人民共和√一．、7-。H国国家标准GB／T27529--2011马接触传染性子宫炎诊断技术Diagnostictechniquesforcontagiousequinemetritis2011-11-21发布2012-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局学者中国国家标准化管理委员会及111刖置GB／T27529--2011本标准的附录A、附录B、附录C为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(sAC／TC181)归口。本标准起草单位

2、：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国新疆出入境检验检疫局。本标准主要起草人：朱来华、梁成珠、郑小龙、肖西志、邓明俊、辛学谦、谭乐义、方绍庆、王宫璞、岳志芹、季新成、王群、孙涛、赵玉然。1范围马接触传染性子宫炎诊断技术GB／T27529--20”本标准规定了马接触传染性子宫炎(contagiousequinemetritis，CEM)的诊断技术。本标准适用于马接触传染性子宫炎的诊断和检疫。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改(不包括勘误的内

3、容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB／T4789．282003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB／T668Z分析实验室用水规格和试验方法3临床检查3．1I临床特征公马感染马生殖道泰勒氏杆菌后不表现任何临床症状，当母马感染后表现阴道炎、子宫颈炎，初期外阴部出现大量渗出物或灰色炎症分泌物，后期渗出物或分泌物逐渐变成黏稠的脓液，其中含有大量的多核细胞、黏膜脱落细胞和崩解的细胞碎片。3．2判定根据3．1临床检

4、查可作出初步判定。为了确诊需进行实验室检查，细菌学检查是确诊本病最可靠的方法。4病原分离与初步鉴定4．1材料准备4．1．1器材4．1．1．1微量移液器。4．1．1．2二氧化碳培养箱。4．1．1．3普通冰箱及低温冰箱(4℃、一20℃)。4．1．1．4离心管。4．1．1．5普通生物显微镜。4．1．1．6暗视野或相差显微镜。4．1．1．7载玻片。4．1．1．8接种环。4．1．1．9擦镜纸。4．1．2实验室用水实验室用水是指实验室用于溶解、稀释或配制溶液的水，可用多次蒸馏或离子交换等制备，符合GB／T6682二级水要求。4．1．3

5、培养基4．1．3．1运输培养基：见附录A。4．1．3．2选择性琼脂培养基：见附录A。】GB／T27529—20114．1．3．3含硫酸链霉素(200／zg／mL)选择性琼脂培养基：见附录A。4．1．3．4卵黄氯化钠琼脂培养基：见附录A。4．1．4试剂4．1．4．1除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯。4．1．4．2革兰氏染色液：按GB／T4789．28—2003中2．2规定配制。4．1．4．3过氧化物酶试验试剂：按GB／T4789．282003中3．18规定，临用时配制。4．1．4．4氧化酶试验试剂：按GB／T4789

6、．28—2003中3．20规定，临用时配制，于冰箱内避光保存。4．2样品采集和运送在采集泌尿生殖道拭子前应至少停用抗生素药物7d，也不得使用消毒药物冲洗泌尿生殖道。母马或公马保定后，用高压消毒的棉拭子刮擦泌尿生殖道黏膜(尿道隐窝、尿道窦、尿道或阴茎鞘)以刮取含有细胞、分泌物的样品。从阴蒂窝和阴蒂窦刮取拭子进行分离培养即可证明马生殖道泰勒氏杆菌的存在，但要获得纯净的培养物，应从子宫颈或子宫内膜中采集样品来分离。公马：每匹公马分别从阴茎基部／包皮处(包皮垢)、尿道隐窝／尿道窦、尿道日采集3份拭子。未怀孕母马：每匹母马分别从子宫

7、颈、阴蒂隐窝、阴蒂窦采集3份拭子。怀孕母马：每匹母马分别从阴蒂隐窝、阴蒂窦采集2份拭子。棉拭子采集后，迅速插入装有1mL～2mL含活性炭的运输培养基离心管内，以吸附掉细菌代澍产生的抑制因子。在低温条件(2℃～8℃)下，样品尽快(24h～48h内)送往实验室。4．3病原分离培养样品到达实验室后，立即用棉拭子蘸取样品液直接涂布于选择性琼脂培养基和含硫酸链霉素(200Fzg／mL)选择性琼脂培养基平板上，每个拭子均接种2个平板。平板在5％～10％的二氧化碳培养箱内35℃～37℃培养，最初24h应检查是否有杂菌污染。48h后应每天

8、观察，培养7d～14d。4．4病原初步鉴定4．4．1菌落鉴定48h后应每天观察琼脂培养基。观察培养基上有无疑似特征性菌落。马生殖道泰勒氏杆菌的菌落很小，直径2mm～3mm，边缘完整光滑，有光泽，呈浅灰黄色。如无特征性菌落，可弃之。4．4．2革兰氏染色鉴定按GB／T4789．28—2003中2．2规定操作