实验五实验六 酵母菌形态观察 显微计数法课件.ppt

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1、实验五实验六酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定微生物显微镜直接计数法一、目的要求1.学习自制水浸片法观察酵母菌的方法2.观察酵母菌形态和出芽生殖方式3.学习并掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法4.了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能二、实验原理1.酵母菌可以用单纯的水制成水浸片观察，也可以用染色液制成水浸片观察。2.美兰是一种无毒性染液，有两种形态还原型：无色氧化性：蓝色活细胞因新陈代谢而有强还原力使美兰从氧化型变为还原型；死细胞无此能力，而被美兰染成蓝色。以此可以区分死活细胞。3.测定微生物细胞数量的方法

2、很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽构成3个平台.中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。血球计数板计数区的刻度有两种：一种是25×16：计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是16×25：一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。每毫升菌液中的菌数=——×25（16）×10×1000×BA：5个中方格中的酵母菌数B：稀释倍数A5三、实验材料1.菌种：啤酒

3、酵母2.染色液：0.1%吕氏碱性美蓝3.器材：载玻片，显微镜、血球计数板、盖玻片、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。（一）.酵母菌个体形态观察用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活细胞区别四、内容及方法1、在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液，盖上盖玻片，（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片）2、将制好的水浸片放置2分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。3、染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。4、染色一小时后，再观察一下死细胞数是否增加。（二）、显微镜直

4、接计数法1.镜检计数室，熟悉计数器的使用方法2.对稀释5倍的啤酒酵母悬液进行计数3.注意：（1）血球计数板必须洗干净，勿刷（2）注意勿损坏计数器计数原则：1、稀释浓度要合适，每个小方格5-10个酵母菌2、压线的酵母菌，一般计上和右3、对于出芽的菌体，如果芽体超过母体的一半，算2个菌五、实验结果1.酵母个体形态，芽体（绘图）2.计算死活细胞的比率，说明吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间对死活细胞数的影响3.计数结果酵母个体形态六、思考题1.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般的细菌？2.某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请

5、设计1-2种可行的检测方法。