国标-菌落总数测定电子教案.doc

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1、国标-菌落总数测定精品文档食品卫生微生物学检验　菌落总数测定 　　1　主题内容与适用范围 　　本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。 　　本标准适用于食品中菌落总数的测定。 　　2　术语 　　菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。 　　菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行

2、卫生学评价时提供依据。 　　3　引用标准 　　GB4789.28　食品卫生微生物学检验　染色法、培养基和试剂 　　4　设备和材料 　　4.1　温箱：36±1℃。 　　4.2　冰箱：0～4℃。 　　4.3　恒温水浴：46±1℃。 　　4.4　天平。 　　4.5　电炉 　　4.6　吸管。 　　4.7　广口瓶或三角瓶：容量为500mL。 　　4.8　玻璃珠：直径约5mm。 　　4.9　平皿：直径为90mm。 　　4.10　试管。 　　4.11　放大镜。 　　4.12　菌落计数器。 　　4.13　酒精灯。 　　4.14　均质器或乳

3、钵。 　　4.15　试管架。 　　4.16　灭菌刀或剪子。 　　4.17　灭菌镊子。 　　5　培养基和试剂 　　5.1　营养琼脂培养基：按GB4789.28中4.7规定。 　　5.2　磷酸盐缓冲稀释液：按GB收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档4789.28中3.22规定。 　　5.3　生理盐水。 　　5.4　75%乙醇。 　　6　检验程序 　　菌落总数的检验程序如下。 　　（图略） 　　7　操作步骤 　　7.1　检样稀释及培养 　　7.1.1　以无菌操作，将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或

4、其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。 　　固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～10000r/min的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液。 　　7.1.2　用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1∶100的稀释液。 　　7.1.3　另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1

5、支1mL火菌吸管。 　　7.1.4　根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。 　　7.1.5　稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照 　　7.1.6　待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档温箱内培养48±2h。

6、 　　7.2　菌落计数方法 　　做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 　　7.3　菌落计数的报告 　　7.3.1　平板菌落数的选择 　　选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌

7、落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。 　　7.3.2　稀释度的选择 　　7.3.2.1　应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见表中例1)。 　　7.3.2.2　若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3)。 　　7.3.2.3　若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数

8、报告之(见表中例4)。 　　7.3.2.4　若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。 　　7.3.2.5　若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表中例6)。 　　7.3.2.6　若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之