CRISPRCAS9慢病毒系统概述.pdf

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1、CRISPR/CAS9慢病毒系统吉凯基因CRISPR/CAS9系统原理CRISPR/CAS9系统：基因组定点切割系统。定点：sgRNA，碱基互补配对切割：CAS9蛋白，核酸内切酶CRISPR/CAS9系统原理无模板有模板随机修复（NHEJ）重组修复(HDR)读码框移位精确插入碱基蛋白无表达KnockinKnockoutGeneknockoutGeneknockinCRISPR/CAS9VSRNAi-敲除效果lentiCRISPRsabolishedEGFPfluorescencein93±8%ofcellsafter11days.

2、参考文献：Science.2014Jan3;343(6166):84-7.doi:10.1126/science.1247005Genome-scaleCRISPR-Cas9knockoutscreeninginhumancells.CRISPR/CAS9VSRNAi-靶点一致靶点间一致的概率：CRISPR/CAS9：78±27%shRNA：20±12%参考文献：Science.2014Jan3;343(6166):84-7.doi:10.1126/science.1247005Genome-scaleCRISPR-Cas9knockouts

3、creeninginhumancells.CRISPR/CAS9VSRNAi-表型呈现RNAi敲减OK无表型CRISPR/CAS9表型明显参考文献：Science.2014Jan3;343(6166):84-7.doi:10.1126/science.1247005Genome-scaleCRISPR-Cas9knockoutscreeninginhumancells.CRISPR/CAS9VSRNAi与RNAi相比，CRISPR/CAS9在基因功能学研究中具有独到优势：对比RNAiCAS9作用水平mRNA水平基因组水平所有基因组序列，如外

4、显子，内含靶位点范围仅转录本子，启动子，增强子，基因间序列等靶蛋白消除水平不完全消除完全消除靶蛋白功能部分丧失完全丧失消除后具功能靶基因表型呈现不一定呈现肯定呈现针对同一基因多靶点表型一致率20±12%78±27%参考文献：Science.2014Jan3;343(6166):84-7.doi:10.1126/science.1247005Genome-scaleCRISPR-Cas9knockoutscreeninginhumancells.CRISPR/CAS9系统载体慢病毒载体在基因功能学研究中具有独到优势：质粒慢病毒腺病毒构建时间7

5、days，快25days，较快45days，慢使用范围少数易转细胞，窄大多数细胞，宽大多数细胞，宽导入效率少数较高多数高多数高细胞分裂表达水平减弱，直至丢失稳定表达减弱，直至丢失对细胞状态影响较大小较大持续表达时间短长，可永久表达较长，终会丢失功能学研究适用度局限适用细胞状态影响大新高大上：CRISPR/CAS9与慢病毒Paper1:High-throughputscreeningofaCRISPR/Cas9libraryforfunctionalgenomicsinhumancells.•IF：42Journal:Naturedate：2

6、014MayPaper2:Genome-widerecessivegeneticscreeninginmammaliancellswithalentiviralCRISPR-guideRNAlibrary.•IF：39.08Journal：NatBiotechnoldate：2014MarPaper3:GenerationofmousemodelsofmyeloidmalignancywithcombinatorialgeneticlesionsusingCRISPR-Cas9genomeediting.•IF：39.08Journal：

7、NatBiotechnoldate：2014JunPaper4:Improvedvectorsandgenome-widelibrariesforCRISPRscreening.•IF：26Journal：NatMethodsdate：2014Jul方式一：双慢病毒载体介导的CRISPR/CAS9•Paper1:High-throughputscreeningofaCRISPR/Cas9libraryforfunctionalgenomicsinhumancells.•IF：42Journal:Naturedate：2014MayCAS9表

8、达慢病毒CAS9稳定表达细胞株sgRNA表达慢病毒感染稳定细胞株EGFP绿色荧光筛选细胞出现表型基因功能确定吉凯CAS9双载体慢病毒系统介绍切割：Lenti-CA