高效液相色谱（HPLC）简介课件.ppt

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1、高效液相色谱（HPLC）简介HPLC(HighPerformanceLiquidChromatography)—高效液相色谱法是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器…广泛应用于各个领域:医药,环保,石化,生命科学,食品工业,农业…无论在技术上,理论上,还是在应用上仍处于发展阶段什么是高效液相色谱(HPLC)？液相色谱分析法（一）高效液相色谱分析的流程1、由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。2、被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，

2、在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。3、废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而ＨＰＬＣ改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。（二）高效液相色谱的分离过程同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。操作过程图示色谱分离的机理分离是一个物理的过程。固定

3、相(StationaryPhase)流动相(MobilePhase)样品(溶解于流动相中的溶质)HPLC的特点项目高效液相色谱法气相色谱法进样方式样品制成溶液样品需气化或裂解流动相溶液惰性气体分离原理吸附、分配、筛析、亲和等吸附和分配检测器UVD、PDAD、RID等TCD、FID、ECD等应用范围低、中、高沸点有机化合物离子型无机化合物热不稳定化合物生物活性分子低沸点有机化合物永久性气体高效液相色谱仪构造HPLC的仪器配置及流程检测器简介（一）◆紫外吸收检测器（UVD）原理：用特定波长的紫外光照射样品池，通过检测透光率的变化来测定样品

4、浓度的检测器。它具有波长固定，波长可变和光二极管阵列三种类型。特点：选择性检测器、对流量和温度敏感性低、灵敏度较高（10-9g）。◆折光指数检测器（RID）原理：监测参比池和测量池中溶液的折射率之差来测量试样浓度的检测器。特点：通用性检测器，温变化要保持在±0.001℃、灵敏度低（10-6g）。检测器简介（二）◆电导检测器（ECD）原理：监测溶液的电导率变化的检测器。特点：选择性检测器、测量时要求恒温、对流动相的组成变化有明显响应、灵敏度低（10-3g）。适用于离子型化合物。◆荧光检测器（FLD）原理：某些溶质在紫外光激发后能发射可见

5、光（荧光）的性质检测。特点：选择性检测器、灵敏度高（10-12g）、对流量和温度敏感性低。检测器简介（三）◆蒸发光散射检测器（ELSD）原理：通过检测光散射程度而测定溶质浓度的检测器。色谱柱后流出物在通向检测器途中，被高速载气（氮气）喷成雾状液滴，再进入蒸发漂移管中，流动相不断蒸发，含溶质的雾状液滴形成不挥发的微小颗粒，被载气载带通过检测器。在检测器中，光被散射的程度取决于溶质颗粒的大小与数量。特点：消除了溶剂的干扰，不受温度变化影响，灵敏度高，是通用型检测器。紫外吸收检测器有三种类型固定波长紫外吸收检测器：低压汞灯提供固定254nm

6、或280nm紫外光。可变多波长检测器：氘灯做光源，光栅分光光二极管阵列检测器photo－diode－arraydetector（PDAD，PDA,DAD）：钨灯和氘灯组合光源，进入检测池的不是单色光，而是一段紫外波长上的光。PDA可以辅助定性。液相色谱分析法的特点在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化。兼具分离和分析功能，可以在线检测。高效液相色谱法的主要类型及原理1、液-液分配色谱2、液-固吸附色谱3、离子交换色谱4、离子对色谱5、离子色谱6、排阻色谱7、亲和色谱(AC)液-液分配

7、色谱固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相normalphase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相reversephase）。正相与反相的出峰顺序相反；固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。反相键合相色谱柱最常用的就是ODS柱，也就是C18柱。正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用

8、的最多，约占60～70％。液相色谱类型色谱柱简介正相柱------固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2）和氰基团（CN）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分