实验1 免疫沉淀凝集技术.ppt

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1、实验1:免疫沉淀凝集技术华西医院实验医学科临床免疫实验室安云飞2018.3.14背景抗原-抗体反应沉淀反应凝集反应直接凝集反应间接凝集反应间接血凝试验胶乳凝集试验明胶凝集试验液体内沉淀试验凝胶内沉淀试验单向扩散试验双向扩散试验絮状沉淀试验免疫浊度测定胶乳凝集试验——RF测定实验原理以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝集试验：聚苯乙烯颗粒具有很强的吸附蛋白质的能力，借此将抗原或抗体与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与待测标本中的抗体或抗原发生凝集反应。RF为抗变性IgG的抗体，因此本实验使用的是人IgG致敏的聚苯乙烯颗粒。试剂和器材RF检测试

2、剂（商品化试剂）RF阴性血清和阳性血清（试剂盒自带）黑色反应板、滴管、搅拌棒等操作方法在黑色反应板上取3格，用滴管分别加待测血清、阳性血清和阴性血清各1滴，然后每格加入1滴致敏胶乳颗粒试剂。用搅拌棒充分混匀后，连续摇动2~3min后与对照比较，观察结果。结果判断胶乳颗粒凝集且液体澄清者为阳性，胶乳颗粒不凝集仍保持均匀胶乳状者为阴性；首先观察阳性血清和阴性血清的反应结果，若前者为阳性反应后者为阴性反应，说明试剂有效；然后再观察待测样品的反应情况，并判断阴阳性。方法学评价该试验方法简单、快速、特异性强、结果清晰易观察判断。观察时应注意排

3、除非特异性凝集反应。如何进行半定量分析？CIC测定实验原理：PEG沉淀法聚乙二醇（PEG），分子量6000，具有较强的脱水作用，可引起蛋白质沉淀，沉淀具有选择性且对蛋白质生物活性无影响。是免疫浊度测定技术中常用的增浊剂。PEG沉淀蛋白质的选择性与其浓度相关：2%PEG只能沉淀大分子，4%PEG能沉淀较小分子的循环免疫复合物大于5%PEG，选择性沉淀特性消失。在PH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的PEG浓度越小。分离血清免疫复合物一般采用最终浓度为3%~4%PEG。血清中加入最终浓度约为3.5%的PEG后，其浊度与

4、血清中免疫复合物含量相关，用分光光度计测定其OD值，代表免疫复合物相对含量。试剂和器材试剂1：0.1mol/LPH8.6硼酸缓冲液试剂2：3.75%PEG-硼酸缓冲液仪器：721分光光度计操作方法加样：对每一份标本，取两试管按下表操作加入物（单位：mL）对照管测定管待测血清0.10.1试剂1（硼酸缓冲液）3试剂2（PEG-硼酸缓冲液）3操作方法将以上反应管充分混匀，置室温1小时。用721分光光度计在460nm波长下测定OD值。关机，清洁仪器，盖上布罩。正常参考值：OD<0.15结果易受多种大分子蛋白质的干扰，特异性差。本试验还受温度

5、变化的影响很大，重复性差。CIC的检出可以为多种与自身免疫相关疾病提供辅助诊断诊断指标，但由于方法上的问题，其测定结果尚不能作为诊断疾病的敏感可靠的指标。实验报告的要求内容：题目、实验原理、试剂及器材、实验步骤、实验结果（注明样本编号和原始数据）、讨论等。实验报告由班长收齐后于下次上课时交上课老师。