色谱的定性和定量分析课件.ppt

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1、色谱的定性和定量分析刘芳2010.10.15复习回顾色谱的分类气相色谱仪的构造气象色谱仪的应用色谱流出曲线和术语色谱分析基本原理一、定性分析定性分析的依据：保留值（tR或tR’）定性：当我们得到一张色谱图，谱图中有多个色谱峰，我们怎么能够知道每个峰代表什么物质呢，这就是定性。从色谱图中我们可以知道每个色谱峰都有一个对应的保留时间，就是说不同的物质保留时间不同，之所以保留时间不同，主要是在于色谱柱的分离作用，由于不同物质与色谱柱中固定相的作用不同，而从色谱柱中流出快慢的因素。因此我们可以利用保留时间进行定性。1.保留时间定性2.利用不同检测方法定性3.保留指数定

2、性4.柱前或柱后化学反应定性5.与其他仪器联用定性一、定性分析1.保留时间定性在一定的色谱系统和操作条件下，每种物质都有一定的保留时间，如果在相同色谱条件下，未知物的保留时间与标准物质相同，则可初步认为它们为同一物质。(见图示)为了提高定性分析的可靠性，还可进一步改变色谱条件(分离柱、流动相、柱温等)或在样品中添加标准物质，如果被测物的保留时间仍然与标准物质一致，则可认为它们为同一物质。一、定性分析1.保留时间定性用已知纯物质与未知样品对照比较进行定性分析图示a.甲醇峰；b.乙醇峰；c.正丙醇峰；d.正丁醇峰；e.正戊醇峰；1-9：未知物色谱峰一、定性分析2.

3、利用不同检测方法定性同一样品可以采用多种检测方法检测，如果待测组分和标准物在不同的检测器上有相同的响应行为，则可初步判断两者是同一种物质。在液相色谱中，还可通过二极管阵列检测器比较两个峰的紫外或可见光谱图。一、定性分析3.保留指数定性在气相色谱中，可以利用文献中的保留指数数据定性。保留指数随温度的变化率还可用来判断化合物的类型，因为不同类型化合物的保留指数随温度的变化率不同。4.柱前或柱后化学反应定性一般不采用一、定性分析5.与其他仪器联用定性将具有定性能力的分析仪器如质谱(MS)、红外(IR)、原子吸收光谱(AAS)、原子发射光谱(AES，ICP-AES)等

4、仪器作为色谱仪的检测器即可获得比较准确的定性信息。一、定性分析二、定量分析定量分析的依据：峰高h，峰面积A色谱图A或h样品的量样品的量m∝A或h校正因子定量分析的依据：被测组分的量与检测器的响应值成正比，也就是与它在色谱图上的峰面积或峰高成正比。1.峰面积的计算2.定量校正因子3.定量计算方法二、定量分析二、定量分析1.峰面积的计算(1)对称峰：（2）不对称峰：（3）色谱工作站：直接给出A、h、引入定量校正因子的原因：我们知道，被测组分的量与它在色谱图上的峰面积或峰高成正比。但是，相同量的两种不同组分在同一检测器(例如紫外检测器)中的响应值并不相同，也就是两者

5、的峰面积或峰高不相同。所以，两者的峰面积或峰高之比并不等于两者的含量之比。因此，需要引入定量校正因子，使峰面积或峰高经过校正后，与其代表物质的量相适应。二、定量分析2.定量校正因子定量校正因子的定义：进入检测器的组分的量(W)与其色谱峰面积(A)或峰高(h)之比为一比例常数f′,该比例常数f′就称为该组分的绝对校正因子。W的单位校正因子名称符号质量(g)绝对质量校正因子物质的量(mol)绝对物质的量的校正因子体积(L/mL)绝对体积校正因子二、定量分析2.定量校正因子相对校正因子：由于化合物的绝对校正因子难以测定，它随实验条件的变化而变化，故很少采用，实际工作

6、中一般采用相对校正因子：某组分i与所选定的基准物质s的绝对定量校正因子之比。二、定量分析2.定量校正因子二、定量分析2.定量校正因子获得校正因子的方法：一是查文献、手册获得；二是实验测定。因所用检测器类型和色谱条件与文献不同或者查不到，需自行测定。方法：一定量的待测物＋选定的基准物→制成一定浓度的混合溶液进样，测得两组分色谱峰面积Ai和As，由公式求得。注意事项：相对校正因子与待测物、基准物和检测器类型有关，与操作条件(进样量)无关。选取基准物的原则：与待测物保留时间比较接近；TCD→苯，FID→正庚烷。以氢气和氦气作载气的校正因子可通用；以氮气作载气测的校正

7、因子与两者差别大。请设计甲苯对苯相对校正因子的测定步骤并测定准确称取色谱纯（或已知准确含量）的被测组分和基准物质，配制成已知准确浓度的样品，在已定的色谱实验条件下，取一定体积的样品进样，准确测量所得组分和基准物质的色谱峰峰面积，根据计算公式就可以计算出该组分的相对校正因子。测定方法配制已知准确浓度的样品用色谱分析根据公式计算相对校正因子的测定⑴面积归一化法⑵外标法⑶内标法⑷内标对比法二、定量分析3.定量计算方法二、定量分析3.定量计算方法⑴面积归一化法：前提是试样中所有组分都产生信号并能检出色谱峰；依据是组分含量与峰面积成正比。优点：简便，准确，色谱条件略有变

8、化对结果几乎无影响，定量结果与进样量、