学习细菌的革兰氏染色原理和方法 课件.ppt

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1、实验细菌的染色细菌的单染色法细菌的革兰氏染色芽孢染色荚膜的染色1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。2、初步认识细菌的形态特征。3、学习细菌的革兰氏染色原理和方法4、了解细菌的特殊形态结构：芽孢、荚膜的染色5、学习训练无菌操作技术。实验目的细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，

2、经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。实验原理1细菌的简单染色常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。1、菌种枯草芽孢杆菌12～18h培养物金黄色葡萄球菌24h培养物2、染色剂吕氏碱性美蓝染液齐氏石碳酸复红染液实验材料涂片干燥固定染色水洗干燥镜检操作步骤四、实验步骤无菌操作1、涂片取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取）生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无菌操作从枯草杆菌（1d）斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混合并涂成薄

3、膜。如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取1-2环直接涂于载玻片上。Notes:1）载玻片要洁净无油迹2）滴生理盐水和取菌不宜过多3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。操作步骤（continued）菌悬液涂片干燥滴加无菌水固定取菌苔涂片操作步骤（continued）3、固定固定的目的：1）使细胞质凝固，以固定细胞形态；2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。固定方法：热固定：涂面朝上，通过火焰数次注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜，否则会改变甚至破坏细胞形态操作步骤（continued）2、干燥室温自然干燥4、染色◇将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片

4、薄膜为宜）。◇美蓝染色1-2min；石碳酸复红染色约1min。操作步骤（continued）5、水洗倒去染液，用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗，直至涂片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中。Note:水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。7、镜检细菌个体微小，一般使用油镜观察细菌个体形态。操作步骤（continued）6、干燥自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。7、镜检（continued）Notes:必须等涂片完全干后才可滴加香柏油油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净，否则可能损害镜头3）擦油镜镜头方法：分三

5、步A）先用擦镜纸揩去镜头上的香柏油B）从双层瓶的下层沾少许二甲苯滴在另一片擦镜纸上，擦拭镜头；C）再用一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。操作步骤（continued）2、革兰氏染色单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、荚膜染色法等。革兰氏染色（Gramstain）1984年，丹麦医生Gram采用革兰氏染色法细菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+）和革兰氏阳性（G-）革兰氏染色

6、步骤:1）结晶紫初染；2）碘液媒染；3）酒精脱色；4）番红复染G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红复染后呈红色。实验原理细菌的特殊形态结构芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体实验材料大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（2d）、胶质芽胞杆菌革兰氏染色液一套实验步骤革兰氏染色枯草杆菌的芽孢染色荚膜的染色绘图

7、、写实验报告革兰氏染色的步骤1.涂片2.初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。4.脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15－20秒，后立即用流水冲洗。5.复染：滴加番红染色液，染3分钟，水洗后用吸水纸吸干。6.镜检：观察染色结果并绘图。Figure1-AGramstainofGram+Staphylococcuscells.Figure2-GramstainofGram–E.colicells3枯草杆菌芽孢的染色1、制备菌液：加2-4滴蒸馏水于