蛋白质工程的应用实例课件.ppt

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1、第五章蛋白质工程第五章蛋白质工程【知识目标】①了解蛋白质工程的产生背景及目前的发展状况。②理解蛋白质工程的主要的研究过程及具体操作手段。③掌握蛋白质工程的概念并明确其研究的目标。【技能目标】①能够运用蛋白质工程的基本原理解析在实际生产生活中蛋白质工程应用的实例。②掌握胰蛋白酶酶活力的测定方法。第一节蛋白质工程概述一、蛋白质工程的概念根据对蛋白质己知结构和功能的了解，借助计算机辅助设计，利用基因定点诱变等技术，特异性地对现有蛋白质结构基因进行改造，借以改善蛋白质的物理和化学性质，如提高蛋白质的热稳定性、酶的专一性等，或者利用化学和物理手

2、段，对目标基因按预期设计进行进行修饰和改造，合成新的蛋白质的技术手段，并可以借此对蛋白质的结构与功能的关系进行更加深入的研究。第一节蛋白质工程概述二、蛋白质概述（一）蛋白质的组成组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种其中除甘氨酸和脯氨酸外，均属于L-α-氨基酸第一节蛋白质工程概述二、蛋白质概述（二）蛋白质的结构一级结构二级结构三级结构四级结构第一节蛋白质工程概述二、蛋白质概述（三）蛋白质结构与功能的关系1.蛋白质一级结构与功能的关系(1)相似的结构具有相似的功能(2)不同结构具有不同的功能2.蛋白质空间结构与功能的关系空间结构发生改变，其功

3、能活性也必然会随之改变第二节蛋白质工程的研究方法一、蛋白质工程的研究策略研究过程就是通过严格的分子设计，把它定向地改造成一个具有预期的新的特性的蛋白质。一种是对天然蛋白质进行改造；另一种是完全重建一个新的蛋白质。在具体操作中，前者是对天然蛋白质中的少数几个氨基酸残基进行的替换(小改)、分子剪裁(中改)或者局部重建(大改)；后者是从头设计—个全新的蛋白质。我们目前的蛋白质工程研究中主要进行的是“小改”和“中改”。第二节蛋白质工程的研究方法二、改变现有蛋白质的结构（一）小改——少数几个氨基酸残基的替换定点突变是目前蛋白质工程研究的主要技术

4、手段。（二）中改——分子剪裁分子剪裁是指在对天然蛋白质的改造中替换一个肽段或一个结构域。第二节蛋白质工程的研究方法三、蛋白质全新设计对蛋白质的全新设计所应用的技术手段是我们前面所提到的“大改”或“从头设计“工作是在人们认识蛋白质、掌握其结构规律并了解其结构功能关系的基础上进行的。同时也是人们更加深入全面认识蛋白质的一个过程，它的目的是人工创造出自然界中不存在的蛋白质分子，使之具有人们所需要的特殊结构和功能，为人类所利用。目前该技术仍处于实验初级阶段。第三节蛋白质工程的应用实例一、胰蛋白酶胰蛋白酶（EC3.4.21.4）是丝氨酸蛋白酶类

5、，它是一条单链肽，由223个氨基酸残基组成，N末端为异亮氨酸。主要作用于精氨酸或赖氨酸羧基端的肽键。是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。第三节蛋白质工程的应用实例一、胰蛋白酶胰蛋白酶极易自溶，自溶产物经层析分离后，会得到4个具有胰蛋白酶活性的片段。通过对N末端残基的分析，表明这些活性产物是由于Arg117-Val118、Lys145-Ser146及Lys159-Ala160处发生了断裂而出现的。人们运用了蛋白质工程手段，对Arg117位自溶点进行了缺失突变，最终得到了稳定性明显提高的突变株。第三节蛋

6、白质工程的应用实例二、金属硫蛋白金属硫蛋白(metallothionein,MT)是由微生物和植物产生的金属结合蛋白，是一类富含半胱氨酸的短肽，是半胱氨酸残基和金属含量极高的蛋白质，可以通过半胱氨酸的巯基结合大量的金属素，对多种重金属有高度的亲和性。一般由两个大小相近，结构与功能类似的结构域组成，即α-结构域和β-结构域。人们为将含有α-结构域的基因转移到烟草中，成功的获得了对镉，铜，铅等重金属具有较高抗性的工程株。第三节蛋白质工程的应用实例三、人白细胞介素-2IL-2是第—个被发现的白细胞介素。天然人白细胞介素-2是一个由133个氨

7、基酸残基组成的多肽，133个氨基酸中共有3个半胱氨酸，其中有一个半胱氨酸（Cys125）以游离方式存在，而另两个半胱氨酸（Cys58和Cys105）缩合成活性所必需的二硫键。第三节蛋白质工程的应用实例三、人白细胞介素-2人们用蛋白质工程中的定位诱变技术将Cys125的密码TGT转换成TCT或GCA，使Cys125转换成丝氨酸或丙氨酸，避免了错误配对的产生。结果不但使IL-2的生物活性不受影响，而且其热稳定性等方面也得到了较明显的改善。工程IL-2目前已被美国FDA批准上市，用于治疗肾细胞瘤。我国卫生部也已经批准了在国内试生产基因工程白

8、细胞介素-2。第三节蛋白质工程的应用实例四、组织纤维蛋白溶酶原激活因子tPA能够切割纤溶酶原形成纤溶酶，从而激活纤溶作用(fibrino1ysis)，使血栓溶解。作为一种高效特异性溶血栓药物。优点:(1)血栓选择性高但几