细胞生物学课件.ppt

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1、CHAPTER2ExperimentalApproachesforStudyingCells1OUTLINE2.1TECHNIQUESOFMICROSCOPY2.2TECHNIQUESOFCYTOCHEMISTRY2.3TECHNIQUESOFCELLSORTING2.4CELLENGINEERING2.5TECHNIQUESOFISOLATION2.6METHODSOFMOLECULARBIOLOGY2普通光学显微镜32.1TECHNIQUESOFMICROSCOPY2.1.1TheLightMicroscopeResolvingpower,R显微镜的数值孔径(num

2、ericaperture，NA)放大率(magnification,M)4波长与分辨率52.1.2光镜标本制备技术细胞染色技术组织固定和切片技术细胞化学技术利用Feulgen反应可特异性检测细胞中DNA。62.1.3常用光学显微镜◆普通双筒显微镜(binoularmicroscope)◆荧光显微镜(fluorescencemicroscope)◆相差显微镜(phasecontrastmicroscope)72.1.3常用光学显微镜◆倒置显微镜■物镜与照明系统的位置颠倒。■集光器与载物台之间的工作距离提高,可以放置培养皿、培养瓶等容器,直接对培养的细胞进行照明和观察。

3、8倒置显微镜92.2电子显微镜(Electronmicroscope)1932年德国学者MaxKnolls和ErnstRuska用波长比光短得多的电子作光源,发明了第一台电子显微镜，大大提高了显微镜的分辨率，开拓了超微世界。102.2.1电子显微镜概述电子显微镜的基本结构电子显微镜基本结构由三大部分组成:●电子光学系统由照明系统、标本室、成像系统、观察窗和记录用的照相机等组成；●真空系统是保持电镜的真空度；●电子学系统即供电系统，需要高压稳压。11透射电子显微镜12电子染色标本对电子的散射能力取决于其组成元素的原子序数,原子序数越高,散射的电子越多,反差就越大。生物分子是

4、由一些原子序数很低的轻元素(氢、氧、碳、氮等)组成的,它们散射电子的能力很弱,在电镜下几乎不存在明暗反差。为使生物样品加大反差,就要进行染色,即用重金属增加电子散射能力,称为电子染色。13电镜样品的制备142.2.2TransmissionElectronMicroscope◆冰冻蚀刻术(freeze-etching)是专门观察样品外表面的投影复型术。15冰冻蚀刻技术162.2.3ScanningElectronMicroscope原理：目前一般扫描电镜的分辨率约60～100Å(6～10nm)。17扫描电镜182.2.4ScanningTunnelingMicroscope

5、,STM◆基本原理19扫描隧道显微镜工作原理202.2.4扫描隧道显微镜扫描隧道显微术在生命科学中的应用◆DNA结构研究；◆胶原、纤维和蛋白质结构研究；◆细胞膜表面结构的研究。21扫描隧道电镜下的DNA双螺旋222.3TECHNIQUESOFCYTOCHEMISTRY2.3.1酶细胞化学技术酶细胞化学技术就是通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内的定位。2.3.2免疫细胞化学技术免疫荧光技术免疫电镜技术232.4Radioautography放射自显影的原理是利用放射性同位素所发射出来的带电离子(α或β离子)作用于感光材料的卤化银晶体,从而产生潜影。这种潜影可用显

6、影液显示,成为可见的“像”。因此,它是利用卤化银乳胶现象,检查和测量放射性的一种方法。24放射自显影术252.5分析细胞学技术2.5.1流式细胞术(Flowcytometry)流式细胞器(Flowcytometer,FCM)26流式细胞术27细胞分选28细胞标记29染色体分选30染色体标记312.6细胞工程技术(CellEngineering)2.6.1细胞培养体外细胞培养的条件无血清培养∶环境因素∶无菌环境、合适的温度、一定的渗透压和气体环境、O2和CO2。后者对于维持细胞培养液的酸碱度十分重要。代谢物和废物排除：32KnockoutMiceThetechnique

7、usedtogenerateknockoutmicewasdevelopedinthelate1980sbyMarloCapecchiattheUniversityofUtah.实验分三步∶◆构建重组体；◆转基因敲除；◆筛选。33基因敲除34基因敲除示意图（1）35基因敲除示意图（2）36基因敲除原理37KnockoutMice38未来的生物技术39