工具酶的发现和基因工程的诞生课件.ppt

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1、第一章基因工程1.1工具酶的发现和基因工程的诞生什么叫基因工程？基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。（一）基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程实质结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达基因重组DNA重组技术的基本工具准确切割DNA的工具（“分子手术刀”）DNA片段的连接工具（“分子缝合针”）基因转移工具（“

2、分子运输车”）基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具：思考在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源DNA的入侵而灭绝，仍能保持一种稳定状态？怎样才能使外来的DNA失效从而保护自身？识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。微生物4000种。1、来源：2、种类：3、作用：4、结果：形成两种末端一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶黏性末端平末端特异性限制酶切割D

3、NA后形成的末端——黏性末端、平末端是如何形成的？重播大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。什么叫黏性末端？当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。什么叫平末端？当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？要切两个切口，产生四个黏性末端。如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？会产生相同的黏性末

4、端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。思考基因的针线──DNA连接酶切断的DNA片段要与受体细胞的DNA连接，你觉得可以用什么酶？2.DNA连接酶——“分子缝合针”DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。“分子缝合针”——DNA连接酶根据酶的来源不同，可以将这些酶分为两类：1.从大肠杆菌中分离得到：E.coliDNA连接酶，只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接。2.从T4噬菌体中分离到：T4连接酶，既可以“缝合”双链DNA片段互补的粘性末端，又可以“缝合”双链DNA片

5、段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。基因的针线：DNA连接酶GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCG同种限制酶切割基因进入受体细胞的载体要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是载体。基因进入受体细胞的载体假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？如果载体对受体细胞有害将怎样？作为载体的必要条件能够在宿主细胞中复制并稳定地保存具多个限制酶切点，以

6、便与外源基因连接。能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；具有某些标记基因，便于进行筛选。对受体细胞无害比较容易得到“分子运输车”——运载体1.作用：2.种类：质粒、噬菌体和动植物病毒将外源基因送入受体细胞。质粒的特点:1、细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子；2、质粒的存在对宿主细胞无影响；3、质粒的复制只能在宿主细胞内完成。3、基因的运输工具——运载体能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。科技探索之路基因工程诞生的理论基础：DNA是生物遗传物质的发现、DNA双螺旋结构的确立以及遗传信息

7、传递方式的认定基因工程的技术保障限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒载体本节归纳科技探索之路基因工程诞生的理论基础：DNA是生物遗传物质的发现、DNA双螺旋结构的确立以及遗传信息传递方式的认定基因工程的技术保障限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒载体本节归纳