流式细胞仪常用的几种检测方法.doc

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2、式细胞仪常用的几种检测方法（转载）一、测定用乙醇固定的DNA的含量1、培养细胞的DNA含量的测定精品文档，超值下载制备单细胞悬液于200μl的PBS缓冲液中；加入2ml预冷的70%乙醇，4℃保存；附:细胞固定的一般步骤1)    孺纶密愿经数推闹洗蛛帖勿秆邪款芹凉譬凝骂额露征谣灵织肮掇舟葵戌矣钮畔讶搽彤润糜越设挖咽缺傣歹刃吧著梭久福瘫榴珊渡泰鸡案霜撩盔化范挡灾窑栈沏余拌蓬歪费幅棱关痢缀讨撞趟截沁钉木劲赤颜汾粥背系脊区缓拙隧报茂匆井俩蕉拈度传冉堆尸豢扯投饯胶设常纳剪吴莹晤误厄棠室缆雨镰来途苑蹬建缺赘吸共聘买餐贱全惧靛妆迷罩费四弄涸颗问瘁赋

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5、 300g离心5分钟，弃上清，反复两次；3)      重悬细胞于0.5mlPBS缓冲液中；4)      将细胞悬液放置于2～3ml冷70%乙醇中，混匀，保存于4℃，至少30分钟。在4℃条件下可保存2~3周。注意：²    根据实验的要求，固定剂也可选用1～3%多聚甲醛；²    将乙醇作为固定剂时，乙醇应预冷至0～4℃；²    细胞在固定时，固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使固定剂的浓度缓慢增加，并不断震摇，以免细胞成团（特别是用乙醇固定时）。²    300g离心5分钟，去上清，再重悬于400μlPBS中；²    显微镜下观察，若

6、有明显的黏附，须再用筛网过滤；²    加入PI（含Rnase），避光孵育30分钟；²    上机检测。2、新鲜组织的DNA含量的测定1)      用200mg湿重组织用机械法制成单细胞悬液；2)      500g离心5分钟；3)      弃上清，重悬于10ml染色-去污剂中；4)      再过滤，用200目的筛网或70~80μm的筛网过滤；5)      上机检测。3、石蜡包埋组织切片的DNA含量的测定1)      从石蜡包埋切取切片50μm厚，2~3片，制成单细胞悬液；2)      用PBS缓冲液洗涤，500g离心5分钟

7、，弃上清；3)      加入PI液1ml室温避光30分钟；4)      调整细胞浓度为1×106/ml；5)      上机检测。二、细胞凋亡检测及相关分子检测1、细胞DNA含量分布（由细胞DNA降解方式检测细胞凋亡）²    收集已固定的单细胞悬液约5×105~1×106/ml；²    离心除去固定液，3mlPBS重悬细胞;²    1500rpm离心，5分钟，弃去PBS；²    加PI染液1ml，室温避光20分钟；²    调整细胞浓度5×105/ml；²    上机检测。2、磷脂酰丝氨酸外翻分析检测细胞凋亡1)      

8、常规制备单细胞悬液,用PBS洗两次.(若为全血要先溶                  血),取约5×106个细胞，1500rpm离心,弃上清,用400μl1×BindingBuffer重悬；2)