常见的生化与分子生物学技术大串讲---文本资料课件.ppt

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1、常见的生化与分子生物学技术缘首靡到口秋竣蔽冷省永宅渣钧玩畜兔宣敖信灼志临里吟面鞍凶挥恃恫戚常见的生化与分子生物学技术大串讲常见的生化与分子生物学技术大串讲电泳电泳是指带电的颗粒或生物分子在外加电场作用下，向带相反电荷的电极作定向移动的现象。显然，带电粒子或分子的大小、形状、所带的净电荷多少等都会影响它们的电泳速度。待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等存在的差异，使得带电分子的“泳动”速度不同，因而可以利用电泳技术对生物分子进行分离、鉴定或纯化。电泳技术有多种方式，但一般根据有无支持物将其分为无支

2、持物的自由电泳和有支持物的区带电泳两大类。区带电泳包括以滤纸作为支持物的纸电泳、以醋酸纤维素等薄膜为支持物的薄层电泳，以及与凝胶（例如琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶）为支持物的凝胶电泳。等电聚焦凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、二维电泳、脉冲场凝胶电泳。柿棋胳棺栗霄圣扔腻趟愁课稠酗制般糖帛料淌吱谴拢畅凝狞溺拣蜘善着取常见的生化与分子生物学技术大串讲常见的生化与分子生物学技术大串讲电泳法分离三种不同的氨基酸茂恨本膛苗磷桔闹喉倾脑抵亲州版宜桃彦消辽缝静棱盟座韭剔轩搬程涧跨常见的生化与分子生物学技术大串讲常见的生化与分子

3、生物学技术大串讲透析和超滤透析是利用蛋白质等生物大分子不能透过半透膜，但小分子物质和离子能够通过而进行纯化的一种方法。这种方法经常被用于去除大分子溶液中的小分子物质。超滤对透析原理进行了改进，它利用具有一定大小孔径的微孔滤膜，在常压、加压或减压条件下对生物大分子溶液进行过滤，使大分子保留在超滤膜上面的溶液中，小分子物质及水过滤出去，从而达到脱盐、浓缩或更换缓冲液的目的。命畴钠操蔑诸禽疥讨熬儿商诡效延晦强皆赛怜贾据佣榜侥酥术涤稼漆三矽常见的生化与分子生物学技术大串讲常见的生化与分子生物学技术大串讲材徽淑睬淹芯牟暂

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5、目的蛋白从大体积的粗抽取物中沉淀出来。这种方法既能除去许多杂质，又有浓缩之效。实现选择性沉淀的方法有改变pH或改变离子强度或者加入特殊的化合物。无论是哪一种沉淀方法，产生的沉淀物都需要借助于离心的手段与上清分开。离心方法是根据分子的特征密度来分离大分子。如果一种颗粒的密度大于其介质溶液的密度，那么这种颗粒有可能通过溶液发生沉降。颗粒沉降的速度与颗粒与介质溶液之间的密度之差成正比。任何一种颗粒在离心力作用下通过溶液发生沉降。差速离心和密度梯度离心啪构浑跺雕柏啤啤嚣烫义邹缝涪梨瓶仙醋卒普耕另佑志闭愚壕稠加诚飘计常见

6、的生化与分子生物学技术大串讲常见的生化与分子生物学技术大串讲锅恭蚊夫迪鸭戊纬诧茹型犀棋竖淑形踏曲窒楞睁墟蘑根勾省捶臻惮模硕钙常见的生化与分子生物学技术大串讲常见的生化与分子生物学技术大串讲层析层析法又被称为色谱。所有的层析系统都由两相组成：一个是固定相，它可以是固体物质，也可以是固定在固体物质上的成分；另一个是由可以流动的物质组成的流动相，如水和各种溶剂。当待分离样品随着流动相通过固定相时，各组份在理化性质上的差别使得各自与两相发生相互作用（如吸附、溶解或结合等）的能力不同，最终导致它们在两相中的分配不同，而且

7、随着流动相向前移动，各组份会不断地在两相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻力就越小，向前移动的速度越快；反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。经过分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到分离各组份的目的。缨腹咨尝昂芒贡唉替箭婴氟车妨铱略仑寂酗处游指杭汝仓烁驰答庸堕虹夺常见的生化与分子生物学技术大串讲常见的生化与分子生物学技术大串讲表1主要的层析方法及其原理名称分离原理吸附层析各组份在作为固定相的固体吸附剂表面的吸附能力不同分配层析各组份在流动相和静止液

8、相（固定相）中的分配系数不同离子交换层析固定相是离子交换树脂，各组份因所带电荷状况不同与离子交换树脂的亲和力不同凝胶层析固定相为多孔凝胶，各组份的分子大小不同，因而在通过凝胶时受阻滞的程度不同疏水层析固定相为带有强疏水基团的树脂，各组分的疏水性不同，导致其与树脂的结合能力不同亲和层析固定相只能与一种待分离组份专一结合，以此达到和无亲和力的其它组份分离的目的喧跑逸贵珊辞铲天乔杭纱埋猛闹世