结核病实验室诊断方法标准化及其注意事项课件.ppt

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1、结核病实验室诊断方法标准化及其注意事项中国CDC结核病防治临床中心王甦民现代结核病控制策略DOTS政府承诺开展以痰检为主的病人发现工作应用标准短程化疗并实施督导管理建立正规的药物供应系统建立监测系统我国结核病控制目标2005年全球结核病控制目标2003年全国现状2004年全国目标2005年全国目标DOTS策略覆盖率（%）1008595100涂阳病人发现率（%）70456070涂阳病人治愈率（%）85>85>85>85结核病细菌学实验室在国家结核病控制规划（NTP)中起到举足轻重的作用应当得到各级政府、领导和有关单位的高度重视！分枝杆菌生物学概述分枝杆菌属裂殖菌纲，放线菌目，种

2、类甚多，目前已命名的有50多种，一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。结核分枝杆菌是1882年郭霍（RobertKoch）从肺结核病人痰标本中发现。是人类结核病的主要病原菌。分枝杆菌呈分支状生长，营养要求比普通细菌高，是一种生长缓慢的革兰氏阳性杆菌。经石炭酸复红染液染色后，可以抵抗盐酸酒精脱色，故称此类细菌为抗酸菌。分枝杆菌分类结核分枝杆菌结构在电子显微镜下可见菌体微细结构。结核分枝杆菌由细胞壁、细胞膜、细胞质、核物质组成。细胞壁厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚。含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。功能：保护细菌的固有形态抵抗酸碱物质及宿主细胞对细菌的破坏和杀伤如果细胞壁

3、有缺陷，细菌只能在高渗环境下生存，则称此类细菌为L型细菌。细胞膜细胞壁内层围绕于细胞质外的富于弹性的半透膜。主要成分是脂类（磷脂）和蛋白质。功能：细菌与外界环境进行物质交换在细胞内一系列代谢活动中起重要作用细胞质是带粘滞性的液体，充满了细胞膜内的整个空间。细胞浆内含有核糖体及其他多种颗粒。功能：细胞合成蛋白质和核酸等生命活性物质的场所细菌对营养物质进行同化作用和异化作用的场所核质由单一双股DNA组成。电镜下由极细的纤维物质所组成，与细胞质不分开，无核膜、核仁。功能：细胞遗传的物质基础。菌体主要成分脂类多糖蛋白质核酸盐类脂类（1）结核菌体脂类含量比其他细菌高，占细胞壁干重的60％

4、，是引起结核病特征性变化与表现的物质基础。脂质含量与细菌毒力相关，毒力强的结核分枝杆菌（Mtb）含脂最高。脂质主要有磷脂、脂肪酸、蜡质等成分，多与蛋白质、多糖以结合形式存在。脂类（2）磷脂：刺激机体单核细胞增生，增强菌体成分诱导机体致敏的作用。索状因子：与Mtb毒力密切相关。硫脂：含有S元素的脂类，与细菌抵抗力有关。蜡质：占脂质总量48％，分A、B、C、D。结核菌酸：促进机体形成结核结节。分枝菌酸：为结核菌菌体的重要成分，与结核菌的抗酸性有关。多糖由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、甘露聚糖和葡聚糖等组成。多以脂类、蛋白质和核酸等结合形式存在。是免疫反应的重要抗原物质。蛋白质Mt

5、b含多种蛋白质组分，由不同菌体蛋白及活菌在分泌过程中分泌于细胞外的多种蛋白组成。结核菌的主要抗原性物质。结核菌素(OT)、纯蛋白衍生物（PPD）为多种蛋白的复合抗原，可刺激机体免疫应答。核酸RNA含量比DNA高4－5倍。RNA分布于细胞质内，DNA存在于细胞核区域内。DNA是遗传物质，将遗传信息传给子代，并指导RNA的合成。RNA是蛋白质和其他细胞成分合成所必须的物质。盐类钙、钾、镁、铁、磷等，约占菌体成分的6％。营养与发育结核菌是兼性需氧菌，在有氧和含有比较低氧的环境下均能生存，比如骨结核，淋巴结核。在少量二氧化碳的环境中生长的也很好。结核菌生长的适宜温度和人体相近为370C

6、结核菌生长所必需的元素有氧、碳、氮、氢、磷、钾、镁等。结核分枝杆菌形态结核菌是兼性需氧菌，无鞭毛、荚膜，无运动能力；形状：0.3-0.6×1-4微米的细长杆状，直或稍弯，镜下常堆积成团、成束、排列杂乱无章，也有呈串珠样、链状、索状者。革兰氏染色阳性，萋-尼氏染色镜下的抗酸杆菌为淡兰色背景下的红色或粉红色细长杆菌。荧光染色镜下的抗酸杆菌在暗色背景下呈黄绿色或橙色荧光。分枝杆菌不易着色，一旦着色可以抵抗盐酸酒精的脱色，称为“抗酸性”。抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学基础是分枝菌属的细胞壁脂质含量较高，并含有大量分枝菌酸。抗酸性与细菌细胞壁的完整性关系密切，若菌体自溶（如标本保存时

7、间过长、温度过高）、结核菌的异型性（如：L-型菌、干酪或脓液中的结核菌）可能失去抗酸性。抗酸性生长特性生长适宜温度37C，PH6.8-7.2。营养要求较高。在常用的罗氏（Lowenstein-Jensen）培养基上生长的菌落粗糙、凸起、致密，有表面皱折，呈颗粒、结节或菜花样，乳白色或米色，不透明。结核菌生长缓慢，在一般培养基上分裂一代需要10-18小时，根据接种菌量的多少，一般10-30天肉眼可见菌落生长。结核病细菌学诊断结核病细菌实验室布局原则1、结核病细菌学检查要有独立的实验室，不得与其