植物细胞工程的基本设备和无菌操作.ppt

《植物细胞工程的基本设备和无菌操作.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、植物细胞工程的基本设备和无菌操作福建农林大学生命科学学院张健一、基本设备1、植物细胞工程实验室的组成洗涤室灭菌室配制室无菌操作室培养室鉴定室驯化移植室2、基本设备玻璃器皿和器械无菌操作设备培养设备其它设备二、无菌操作1、各种灭菌方法及其适用范围A干热灭菌法B湿热灭菌法C熏蒸灭菌法D过滤灭菌法E药剂灭菌法F灼烧灭菌法G照射灭菌法2、无菌操作过程A清洗玻璃器皿的清洗实验材料的清洗B灭菌※培养材料的灭菌以药剂灭菌法为主主要考虑：药剂的灭菌效果、材料对药剂的耐受力※培养基灭菌高压蒸汽灭菌过滤灭菌C接种经过表面灭菌

2、的材料，按不同的要求，经过剪切、整理后，移植到培养基上培养的过程。接种室（无菌操作室）的灭菌接种台的灭菌工作人员注意事项三、培养基的组成及母液的配制1、培养基的组成无机营养：大量元素：N、P、K、S、Ca、Mg微量元素：Fe、Mn、Cu等有机营养：碳源：蔗糖、葡萄糖、果糖氮源：氨基酸类、酰胺类活性物质：烟酸、肌醇、生物素等植物激素：生长素类：IAA、NAA、IBA等细胞分裂素类：激动素、玉米素等其它类：赤霉素、脱落酸、乙烯附加物类：琼脂、椰乳、水解蛋白等2、培养基母液配制配制培养基前，为了使用方便和用量准

3、确，常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类和激素类分别配制成比培养基浓度大若干倍的母液。当配制培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液稀释即可。母液应保存在冰箱中备用，保存时间不可过长，当母液出现沉淀或霉菌团时，则不能使用。实验一培养基母液的配制1、实验目的：掌握培养基母液的配制方法。2、实验内容：（1）培养基母液配制的各种准备工作；（2）以常用基本培养基MS母液的配制以及各种附加成分母液的配制为例，学习培养基母液的配制方法.3、实验仪器：主要包括电子天平、烘干箱、蒸馏水器、冰箱、各类常用玻璃器皿和容器等。

4、4、实验操作方法：玻璃器皿的清洗与干燥药品用量计算称取药品大量元素母液的配制微量元素母液的配制钙盐和铁盐母液的配制激素及其它有机物母液的配制.5、作业：1）按MS培养基配方需要量计算配制100ml母液所需药品量、母液浓度及配制500ml培养基各种母液吸取量2）为什么在配制培养基之前要先配制母液？实验二：MS培养基的配制与灭菌1、实验目的:学习培养基的配制与灭菌操作方法.2、实验内容：培养基的配制,培养基的灭菌.3、实验仪器：主要为台秤,高压灭菌锅,各种玻璃器皿和容器等。4、实验操作方法：量取大量元素量取微

5、量元素量取钙盐、铁盐和其它有机物称取蔗糖和琼脂配制MS培养基调PH值分装培养基培养基灭菌.5、作业：1）高压蒸汽灭菌注意事项有哪些？2）列表计算配制300ml下列培养基（pH＝5.8）所需的各种母液及其它成分用量。AMS基本培养基附加琼脂10g/LBMS基本培养基附加IAA1mg/L、BA2mg/L、琼脂10g/L、蔗糖30g/L实验三：无菌操作技术1、实验目的：掌握细胞工程中的无菌操作技术。学习植物外植体的消毒技术、离体培养的无菌操作技术。2、实验内容：以柑桔种子为例，完成从外植体表面消毒到接种整个过程

6、的操作。每人均独立操作完成。3、实验仪器：主要为超净工作台等。4、实验操作方法：外植体选择表面消毒接种（无菌操作）培养室培养观察。5、作业：在无菌操作过程中，造成污染的原因有哪些？