环境微生物学第七章 微生物生长与生活环境课件.ppt

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1、微生物生长与繁殖衡量微生物生长的指标(1)群体的重量(2)群体的数量第七章微生物生长与生活环境群体水平第七章微生物生长与生活环境第一节微生物纯培养第二节微生物纯培养群体生长规律第三节微生物的生活环境第一节微生物纯培养一、微生物纯培养的概念实验室条件下，由一个微生物细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术纯培养基本步骤：稀释平皿法划线法单细胞挑取法纯培养方法(2)　培　　养(1)　分　　离第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术1、稀释平板分离法：倾注平板法和涂布平板法。基本过程：（1）梯度稀释过程；（2）分离培养过程

2、涂布倾注梯度稀释过程10-110-210-310-410-510-6第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术4)操作要点：无菌操作稀释平板分离法使用过程中的几个问题1)梯度稀释度的确定：需分离微生物在样品中的数量2)选择菌落接种的依据：a、菌落特征；b、菌体的特征3)微生物纯培养的标准：菌落特征一致性2、单细胞挑取法：从待分离材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养的过程。第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术3、平皿划线法(P１３９图７-４)用接种环沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养的过程

3、。第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术第一节微生物纯培养三、目标微生物纯培养筛选的基本思路１、待分离样品的确定２、培养基的选择３、纯化过程环境条件的控制（温度、空气、PＨ、抑制剂）（Ｐ１３８－１４１）（一）纯培养的保存试管斜面培养基低温、干燥、隔绝空气第一节微生物纯培养四、纯培养的保存与复壮1、灭菌彻底2、棉塞大小要合适3、无菌操作保存过程的注意点：防止杂菌污染。（二）纯培养的衰退与复壮第一节微生物纯培养四、纯培养的保存与复壮衰退的原因：衰老、变异衰退的表现：生长缓慢优良性状的丧失抗逆性下降衰退的预防：控制继代频率创造良好的培养条件采取有效的保

4、存方式复　　壮狭义（被动）广义（主动）复壮方法：选　　优汰　　劣第二节微生物纯培养群体生长规律微生物生长的指标(生物量的测定)细胞群体数量的增加细胞群体总重量增加从群体水平上衡量(间接的测定方法)一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律微生物生长量的测定微生物数量的测定显微镜直接计数法稀释平板计数法最大概率法比浊法称重法含N量测定法DNA含量测定法ATP含量测定法代谢活性法微生物重量的测定(一)微生物数量的测定1、显微镜直接计数法使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。优点：操作简便，计数直观。一、微生物生长量的测定第二节微生物

5、纯培养群体生长规律(一)微生物数量的测定2、稀释平板计数法对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。优点：传统计数方法。对设备要求不高。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律10-310-510-410-6(一)微生物数量的测定３、比浊计数法根据细菌悬浮液的吸光度测定其数量。优点：简便，直接。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律(二)微生物重量的测定1、称重法用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离、冼净，称湿重或干重。优点：简单可靠。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律在活性污泥法中采用的指标：（1）混合

6、液悬浮固体(MLSS)（粗放测定）污泥—干燥----称重(W1)（2）挥发性悬浮固体(MLVSS)（相对准确）上述已称重污泥-----马福炉(500度2小时)----冷却---称重(W2)(二)微生物重量的测定2、含氮量测定法根据样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律原理：（1）微生物蛋白质含量稳定（2）氮是蛋白质的稳定成分(蛋白质量=6.25×总含N量)优点：测定准确。二、细菌分批培养群体生长规律第二节微生物纯培养群体生长规律分批培养：将少量的细菌接种到一定体积的液体培养基中，在适宜的条

7、件下培养，最后一次性收获的过程。生长曲线：细菌在新的适宜的环境中生长、繁殖、衰老、死亡的动态变化。根据细菌生长繁殖速率将生长曲线分四个阶段：第二节微生物纯培养群体生长规律缓慢期　对数期　　　稳定期　　衰亡期二、细菌分批培养群体生长规律第二节微生物纯培养群体生长规律缓慢期（延迟期、滞留适应期）滞留适应期二、细菌分批培养群体生长规律特点：分裂迟缓、代谢活跃。产生原因：（2）细胞分裂必需因子的缺乏（1）接种时的机械损伤引第二节微生物纯培养群体生长规律缓慢期（延迟期、滞留适应期）4、菌株的遗传性滞留适应期二、细菌分批培养群体生长规律研究滞留适期长短的意义

8、？影响滞留适应期长短的因素1、培养基成分2、接种物菌龄3、接种量第二节微生物纯培养群体生长规律对数期（指数生长期）特点：（1）代谢活性