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《应用抑制减杂交法分离玉米幼苗期叶片土壤 干旱诱导的基因.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、5期李会勇等：应用抑制差减杂交法分离玉米幼苗期叶片土壤干旱诱导的基因887应用抑制差减杂交法分离玉米幼苗期叶片土壤干旱诱导的基因李会勇1，黄素华1，赵久然2，王凤格2，张中保1，毛毅辉1，王秀堂1，石云素1，宋燕春1，王国英1，黎裕1，王天宇1（1中国农业科学院作物科学研究所，北京100081；2北京市农林科学院玉米研究中心，北京100097）摘要：【目的】分离土壤干旱胁迫条件下玉米幼苗期叶片诱导表达的基因。【方法】本研究利用抑制差减杂交（suppressionsubtractivehybridizatio
2、n，SSH）的方法，以耐旱自交系CN165为材料，构建了土壤干旱胁迫下玉米幼苗叶片的正向抑制差减cDNA文库。【结果】在这个文库中，随机挑取了672个阳性克隆，并进行PCR验证，对所有的单克隆进行了测序。得到了598个有效序列，经过EST聚类分析后，共得到了80个uniESTs。其中57个为contigs。23个为singlets。BLASTN的结果表明，所有的uniESTs都可以在玉米的核酸数据库中找到同源序列。BLASTX的结果表明：68个uniESTs和已知功能的蛋白有高度的相似性，8个uniESTs
3、为未知功能蛋白和假定蛋白，4个uniESTs没有蛋白质的相似性。【结论】在这个cDNA文库中发现了大量抗旱相关的基因，这些基因涉及到植物代谢的多种途径。关键词：玉米；干旱诱导;抑制差减杂交法；耐旱基因IsolatingSoilDrought-inducedGenesfromMaizeSeedlingsLeavesThroughSuppressionSubtractiveHybridizationLIHui-yong1,HUANGSu-hua1,ZHAOJiu-ran2,WANGFeng-ge2,ZHANGZ
4、hong-bao1,MAOYi-hui1,WANGXiu-tang1,SHIYun-su1,SONGYan-chun1,WANGGuo-ying1,LIYu1,WANGTian-yu1(1InstituteofCropSciences,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081;2MaizeResearchCenter,BeijingAcademyofAgriculturalandForestrySciences,Beijing100097)Abst
5、ract:【Objective】Isolationandanalysissoildrought-inducedgenesfrommaizeseedlingsleaves.【Method】AforwardcDNAlibrarywasconstructedbysuppressionsubtractivehybridizationusingseedlingleavesof“CN165”,adrought-tolerantmaizeinbredline.【Result】IntheSSHlibrary,672posi
6、tivecloneswerepickeduprandomly.AfterPCRofeachclone,allthesingleclonesweresequenced.Totally598availablesequenceswereobtained.AfterclusteranslysisoftheESTssequences,80uniESTswereobtained,amongwhich57uniESTswerecontigsand23uniESTsweresinglets.TheresultsofBLAS
7、TNshowedthatalltheuniESTshadhomologoussequencesinthenrdatabase.TheBLASTXresultsindicatedthat68uniESTshadsignificantproteinhomology,eightuniESTswereunknownproteinsandputativeproteins,andfouruniESTshadnoproteinhomology.【Conclusion】Alargegroupofdroughtstress-
8、inducedgeneswerefoundinthecDNAlibrary,whichinvolvedinmanymetabolismpathways.Keywords:Maizeseedlings;Droughtstress;Suppressionsubtractivehybridization(SSH);uniESTs5期李会勇等：应用抑制差减杂交法分离玉米幼苗期叶片土壤干旱诱导的基因8870引言【研究意义】
