欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:56778088
大小:17.00 KB
页数:1页
时间:2020-07-09
《整理)MTS 细胞增殖及毒性试验.doc》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、MTS或CCK8细胞增殖及毒性试验一、所需试剂1、CellTiter96®AQueousOneSolutionCellProliferationAssay试剂盒(-20℃避光保存,4℃保存6周,黄色)(1)MTS:新一代四氮唑蓝盐化合物,即被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成有色的甲瓒产物,其颜色深浅与某些敏感细胞株的活细胞数在一定范围内呈高度相关。(2)PES:吩嗪硫酸乙酯,一种电子偶联剂,具有增强的化学稳定性,这使它可与MTS混合形成稳定的溶液2、CellCountingKit-8(简称CCK-8)(保存条件同上,紫色)(1)WST-8:2-(2-甲氧
2、基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐(2)1-MethoxyPMS:1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯3、药物或毒素(药物IC50等用到)4、96孔板二、实验步骤1、种板(96孔板)(个/孔),先配总管再加样(多算5孔的量来配总管,以免不够用)细胞种类DU145PC3LNCaP22RV1RWPE1种板数1000150020004000每种处理设置3个副孔(空白组可1个),加入100μl培养基:(1)细胞增殖实验:设置NC组,处理组,空白组,6天时间,平均每孔1000-2000个细胞(2)毒性或药物或放疗I
3、C50:设置梯度给药组(包括不给药组),空白组,平均每孔5000-8000个细胞2、在37°C,5%CO2的环境下培养(1)增殖:8h或24h(细胞贴壁时间),也可种板后直接测第一次,作为基准线,之后每隔24小时检测下一天的细胞量(MTS每孔加20μl,CCK8加10μl)(2)毒性和药物:培养24h后加入药物培养48小时及以上3、增殖实验每天测量一次,以100全培养基:20MTS比例配制总管(CCK8以100:10)4、吸掉96孔板内待测孔内培养基,每孔加入120μl稀释后的MTS试剂(CCK8加入110μl)4、在37°C,5%CO2的环境下孵育1-
4、4个小时(一般选2h)5、选取波长,MTS选492nm,CCK8选450nm,读取吸光度值,记录结果,以时间为横坐标,每日吸光值/基准值为纵坐标绘制细胞生长曲线。三、注意事项1、CCK8原理WST-8在电子载体1-MethoxyPMS的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazandye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比2、整个过程不可产生气泡,以免对测光产生影响3、如果需要以后检测每孔加入25ul10%SDS终止反应,避光保存于室温的湿盒中最多可保存18小时4、可在待测孔四周加入PBS防止外围的待测孔液体挥发影响结果
5、。(更新于2018.11)
此文档下载收益归作者所有