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1、1.菌落总数操作步骤1.1 检样稀释及培养1.1.1以无菌操作,取样25g放入225mL灭菌生理盐水或灭菌乳钵中，经充分振摇作成1：10均匀稀释液。1.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1∶100的稀释液。1.1.3 另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。1.1.4 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度
2、的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。1.1.5 稀释液移入平皿后，应及时将凉至45℃营养琼脂培养基，注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照1.1.6 待琼脂凝固后，翻转平板(使平皿底朝上)，置36±1℃温箱内培养48±2h。1.2 菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。1.3 菌落计数的报告1.3.1 平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用
3、两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。1.3.2 稀释度的选择1.3.2.1 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见表1中例1)。1.3.2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3)。1.3.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应
4、按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。1.3.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5)。1.3.2.5 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表1中例6)。1.3.2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。1.3.2.7若只有一个稀释度菌落在适宜计数范围内，计算平均值X稀释倍数；作为结果；若两个连续稀释度的菌落都在适宜计数范围内时按公式计算：表1稀释度选择及菌落
5、数报告方式例次稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数报告方式[cfu/g]10-1 10-2 10-3 1多不可计16420 1640016000或1.6×1042多不可计295461.63775038000或3.8×1043多不可计271602.22710027000或2.7×1044600350313 313000310000或3.1×105527115 270270或2.7×1026000 ＜1×10 ＜107多不可计30512 3050031000或3.1×1042.大肠菌群测定步骤大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌
6、主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。操作步骤2.1检样稀释2.1.1以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。2.1.2用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。2.1.3另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。2.1.4根据
7、食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。2.2乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。2.3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。2.4复发酵实验在上述平板上
