咪唑的性质和溶液配制.doc

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1、咪唑的性质名称：Imidazole；1,3-diazacyclopenta-2,4-dieneCAS号：288-32-4CompoundID：795分子式：C3H4N2  分子量： 68.07726 [g/mol]   H-BondDonor：1  H-BondAcceptor：2pKa：7.1熔点：90-91℃密度：1.23g/cm 3外观：白色固体，或淡黄色固体UVabsorption：λ:260 nmAmax:0.10λ:280 nmAmax:0.10咪唑与不同二价阳离子结合力强弱：（括弧内是结合常数对数，该值越大结合力越强）Ca

2、 2+ (0.1);Mn 2+ (1.6);Fe 2+ (3.3);Co 2+ (2.4);Ni 2+ (2.9);Cu 2+ (4.2);Zn 2+ (2.0)溶液配制：咪唑的水溶性很好，可达500mg/ml，溶液澄清。可以用咪唑来配制缓冲液，其缓冲范围是pH6.2-7.8（25℃）。稳定性及保存：咪唑溶液很稳定，可以高温灭菌处理。2-8℃可保存两年。注意，应当避光保存。注意：咪唑本身在紫外波段下有光吸收！蛋白结晶用的缓冲液中是否应该除去咪唑？问：过完Ni亲和层析柱子之后，洗脱液（elute）中250mM（或500mM甚至1M）的咪唑

3、是否应该出去？答：一般情况下，单纯过一个Ni柱是不够的，即便是样品足够纯，最好还是走一个凝胶过滤层析（分子筛）。走分子筛的过程当中可以很方便将咪唑除去。如果咪唑对于你样品蛋白的稳定性和均一性很重要，则可以考虑保留一定浓度的咪唑，一般来说20mM-200mM是比较合理的浓度范围。一些情况下，如果有咪唑存在，蛋白便不能结晶，这时就需要除去咪唑。咪唑与蛋白之间的关系不能一概而论，不能说一定是什么样的，要看是什么蛋白。例如，前面提到咪唑的合理浓度范围是20mM-200mM，但ArtemG.Evdokimov有一个晶体只能在0.6M咪唑和乙酸缓冲

4、液中长出来，晶体解析出来以后发现每个蛋白分子上结合了两个咪唑分子。有些情况下，经Ni柱纯化获得的蛋白样品除去咪唑后发生沉淀，可能的原因是一部分Ni离子从柱子上脱离下来混在了样品当中。当咪唑被除去以后，Ni便可以与蛋白上的His标签结合造成蛋白质聚集。可以考虑利用螯合剂来除去那些多余的Ni离子。