高中生物 第1章 微生物培养技术 第1节 微生物的分离和纯培养教案 中图版选修1.doc

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1、第一节微生物的分离和纯培养一、培养基1．含义由于微生物代谢方式的不同，因而对营养物质的需求也是有差异的。根据微生物生长繁殖和代谢的需要，将各种营养物质混合在一起而配制的营养基质。2．平板培养基将溶化后的固体培养基基质倒入无菌培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。二、无菌技术1．目的和要求在微生物的分离和纯培养中，一定不能有外来的污染性杂菌，所以必须采用无菌技术进行操作。因此，在实验过程中，要对所用的器材、培养基进行严格的灭菌，对工作场所要进行消毒。2．灭菌和消毒(1)灭菌：用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所有的

2、微生物，常用的方法是高温灭菌法。(2)消毒：用相对温和的理化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营养细胞，常用的方法是射线消毒法和化学药剂消毒法。三、接种技术1．含义把相应的研究对象移入培养基中的过程。2．分类在平板培养基上接种的方法有平板划线法、稀释平板涂布法、稀释混合平板法等。预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1问题2问题3问题4一、微生物的概念及特点1．概念微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。2．特点微生物微生物二、微生物的营养及功能微生物的化学组成成分与

3、其他生物大体相同，也是由C、H、O、N、P、S等元素组成，其中C、H、O、N占细胞干重的90%以上，这些元素最终来自外界环境中的各种无机化合物和有机化合物。这些化合物可归纳成碳源、氮源、生长因子、无机盐和水这五大类营养要素。营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐

4、；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机化合物无机盐　为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂①微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。②在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源，新陈代谢同化作用类型的划分也是根据是否能合成含碳有机物

5、为依据，能合成含碳有机物的是自养型，反之则为异养型。③对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源又是氮源、能源。④微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因子。三、大肠杆菌的分离方法和实验过程1．实验原理微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种

6、。2．材料用具培养16～24h的大肠杆菌(E.coli)培养液，灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基斜面和平板，盛有9mL无菌水的试管，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环等。3．方法步骤微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤。微生物分离操作流程图(1)稀释　用1mL无菌吸管吸取1mL大肠杆菌培养液，加入到盛有9mL无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1mL加入另一支盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，依次制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀释度的大肠杆菌稀释

7、液。(2)划线或涂布平板划线分离法：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，沾取大肠杆菌培养液在平板上划线，常用的划线方法有交叉划线和连续划线两种(如下图)。交叉划线时，每转一个角度烧一次接种环。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。划线法示意图涂布分离法：取3个平板，底面分别用记号笔写上10－4、10－5和10－6三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1mL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5～10min，使菌悬液吸附进培养基(如下图)。涂布法示意图

8、(3)培养　将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37℃培养16～24h，即可长出单个的菌落。四、平板划线操作应注意的问题第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：第一次灼烧每次划线之前灼烧划线结束灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种来自上次划线末端杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污