分子生物学郑敏.ppt

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1、RNA的剪接（RNAsplicing）RNA剪接（RNAsplicing）：从DNA模板链转录出的最初转录产物中除去内含子，并将外显子连接起来形成一个连续的RNA分子的过程。断裂基因(interruptedgene):对可表达为蛋白质的基因，如其初始转录产物与成熟mRNA相比，其间含不能编码为蛋白质的间隔序列，则这个基因称断裂基因。包括内含子（intron）和外显子（exon）。生物体内内含子的种类内含子类型细胞内定位GU-AG,GC-AG,AU-AC细胞核I类细胞器，细菌，低等真核生物细胞核中II类细胞器

2、，细菌双内含子细胞器tRNA前体中的内含子细胞核内含子的删除机理（1）GU-AG型内含子（2）GC-AG型和AU-AC型内含子（3）I类内含子和II类内含子（1）GU-AG型内含子Intron-exonboudarieshaveshortconsensussequencesintheintron5`splicesite含：GU3`splicesite含：AGGU-AG（最初称GT-AG）规则：描述了在前体mRNA中内含子的最初及最末位置上必须出现的恒定的双碱基Correctsplicingremoves3i

3、ntronsbypairwiserecognitionofthejunctions核内RNA完成剪接所需的只是5`位点、3`位点和分支位点（branchsite)的三个短的一致性序列。分支位点位于内含子3`剪接位点18~50个核苷酸处。snRNA是GU-AG型内含子剪接所必需的参与剪接过程的5个snRNP是U1，U2，U4，U5和U6。每个snRNP含一个snRNA和几种蛋白质。snRNP和其他一些辅助蛋白共同构成剪接体。（2）GC-AG型和AU-AC型内含子人类基因组剪接位点：GU-AG＞98%GC-AG

4、＜1%AU-AC≈0.1%注意：这几种内含子在很多基因组内同时存在，有时甚至出现在同一条基因里。（3）I类内含子和II类内含子I类和II类内含子具自我切割能力。自我剪接（self-splicing,autosplicing)：像催化作用一样，内含子能从RNA里切下自已，而这只依赖于内含子中的RNA序列。原始转录产物自由鸟苷酸的3`-OH作亲核基团攻击内含子5`端的磷酸二酯键，从上游切开RNA链RNA剪接中间产物上游外显子的自由3`-OH作为亲核基团攻击内含子3`位核苷酸上的磷酸二酯键，使内含子被完全切开完成

5、剪接的RNAII类内含子的自我剪接过程原始转录产物内含子本身的某个腺苷酸的2`-OH作为亲核基因攻击内含子5`端的磷酸二酯键2`,5`－磷酸二酯键RNA剪接产物与3`末端相连上游外显子的3`-OH作亲核基团攻击内子3`位核苷酸上的磷酸二酯键,使套索结构完全解离套索结构中的腺苷酸带有3个磷酸二酯键完成剪接的RNA内含子Note:I类内含子比II类内含子更普遍，两类之间几乎无联系。但这两类RNA在体外都能自我剪接，而不需其它蛋白质提供酶活性。但在体内需蛋白质帮助折叠。三类剪接反应总结：都是按两步酯交换作用进行：

6、首先游离羟基进攻外显子1和内含子结合处；接着外显子1末端产生的羟基进攻外显子2与内含子结合处；两个外显子相连，内含子释放。