中药成分测定方法.ppt

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1、第四章中药的含量测定1第一节含量测定的目的与意义中药的含量测定与化药有很大区别中药组成复杂，产生疗效的不是某单一成分，检测任何一种活性成分均不能反映中药的整体疗效。但是借鉴化药质量控制模式，测定某一味药味的有效成分、活性成分、指标性成分的含量的方法，对于控制中药质量起着不可替代的重要作用。通过测定中药中有效成分、毒性成分或某些指标性成分的含量来衡量其制剂工艺的稳定性和中药材的质量优劣，以保证中药的质量，达到临床用药安全、有效的目的。2第二节含量测定样品的处理样品处理的主要作用有：将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便于分析测定的稳定试样。除去杂质

2、、纯化样品，以提高分析方法的重现性和准确度。富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。衍生化不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选择性。使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。3第二节含量测定样品的处理一、样品的粉碎1.目的：是保证含量测定所取样品均匀而有代表性，提高测定结果的精密度和准确度；是使样品中的被测组分能更快地完全提取出来。2.粉碎时注意事项：不要粉碎得过细。样品粉碎得过细，在样品提取时，会造成过滤困难，因此可视实际情况进行粉碎过筛。避免污染样品。在粉碎样品时，要尽量避免由于设备的磨损或不干净等原因而玷污样品，防止粉尘飞散或挥发性

3、成分的损失。过筛时，通不过筛孔的部分颗粒决不能丢弃，必须反复粉碎或碾磨，让其全部通过筛孔。4第二节含量测定样品的处理二、样品的提取对于中药材和固体制剂样品，在粉碎后，取粉末适量精密称定，首先用溶剂进行提取，使被测组分和某些共存组分从中溶解出来（前者必须完全溶出），与滤渣分离后，再对被测组分进行含量测定。常见的提取方法：冷浸法回流提取法连续回流提取法超声提取法超临界流体提取法5第二节含量测定样品的处理三、样品的分离净化（一）沉淀法（二）蒸馏法（三）液一液萃取法（LLE）（四）色谱法6第二节含量测定样品的处理（四）色谱法吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和

4、凝胶色谱皆可作为中药制剂分析中的净化分离方法，其操作方式有柱色谱，薄层色谱和纸色谱。其中经典微柱色谱，也称固相萃取或液—固萃取（LSE）具有设备简单，使用方便，快速，净化效率较高而最常用，将在此做一简介。LSE通常是指样品溶液加到装有合适固定相（净化剂）的长5`～15cm，内径0.5～1cm的色谱柱中，将被测成分保留于柱上，洗去杂质后，再洗脱被测成分进行测定，或者是使杂质强烈保留于柱上，直接洗脱被测成分进行测定。用这种选择性好而柱效较低的方法进行样品的净化分离，尤其适用于一类总成分的含量测定，也可将色谱柱流出的样品进一步用GC、HPLC、TCL分离后

5、测定。LSE的常用净化剂（填料）有氧化铝、氧化镁、硅藻土、硅胶、活性炭、大孔树脂离子交换树脂、键合相硅胶C8、C18、聚酰胺等。视其性质可分为亲脂型、亲水型和离子交换型填料。7第二节含量测定样品的处理⒈硅胶、氧化铝等：它们是传统的吸附剂，多以0.07～0.15mm(200～100目)的颗粒1～5g用于样品的净化处理，其作用机制为溶质在吸附剂表面的极性吸附作用。通常是当溶于有机溶剂的样品加到柱上时非极性或低极性的杂质先被洗出色谱柱，再用适当极性的溶剂洗脱被测成分，而强极性的杂质仍保留在柱上。氧化铝能将黄酮类吸附在柱上，用于生物碱、苷类等的测定。例如用Ｕ

6、Ｖ法（吸收系数法）硅胶适合于分离中性或酸性化合物，强烈保留碱性化合物。若把样品提取液加到柱上，依次用极性由小到大的溶剂洗脱，则可以将杂质和被测成分分离。8⒉键合相硅胶：十八烷基键合相硅胶（简称C18或ODS）是常用的固体萃取剂，其次有烷基、苯基、氰基键合相硅胶，可用来分开脂溶性和水溶性杂质或成分。也常用于萃取，纯化水基质体液中憎水性药物。该类LSE的一般操作程序为：1)柱的活化。用2ml甲醇冲洗以润湿键合相和除去杂质，再用0.5毫升水洗去柱中的甲醇。2)上样。3)清洗。用2～5ml的水清洗以除去弱保留的亲水成分，如无机盐、氨基酸、亲水的蛋白质、糖以及

7、中等保留成分的极性化合物、低肽等。4)洗脱。用2～5ml甲醇或甲醇-水洗脱大分子的肽、甾体、较亲脂的药物等强保留的待测组分。第二节含量测定样品的处理9⒊大孔树脂：它可分为极性和非极性型极性丙烯酰胺聚合物;非极性苯乙烯和二乙烯苯的共聚物.其吸附性质与烷基键合相硅胶相似，通过疏水作用对非极性水溶性成份有吸附力。例如在测定复方归芪剂中的黄芪甲苷时，用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质，再用30%乙醇洗脱黄芪甲苷。大孔树脂的主要特点是表面积极大，传质速率较高和具有不同的极性及适于吸附较大分子。树脂在使用前需要前处理：用甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂除去杂质，有时还需用

8、酸、碱清洗。该填料用量常为1～2g，有时也用100～150mg来萃取血、尿中药物，操作程序类似ODS填料。第