专题7 小专题19 生物技术实践.ppt

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1、专题七选修内容小专题19生物技术实践1．微生物的实验室培养要点解读划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂活菌计数、工业生产半固体培养基加凝固剂如：琼脂观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基微生物分离、鉴定、保藏菌种(1)培养基的主要种类划分标准培养基种类特点用途用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物生长培养、分离出特定微生物鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物（续表）(2)消毒和灭菌的区别条件结果常用的方法应用的范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物质表面或内部一部分对人体

2、有害的微生物煮沸消毒法一般物品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等灭菌强烈理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌接种工具干热灭菌玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌培养基及容器的灭菌(3)纯化大肠杆菌的原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这些单个的菌落就是一个个纯化的细菌菌落。2．酵母细胞的固定化(1)实验原理：①固定化酶不溶于反应液中，易于回收，可以重复使用。②固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定于一定空间内的技术。(2)直接使用酶、固定化酶、固定化细胞的比较方法优点缺点直接使用酶催化效率高、耗能低

3、、污染低对环境条件非常敏感、易失活；难回收，成本高，影响产品质量固定化酶既能与反应物接触，又能与产物分离；可以反复利用不利于催化一系列的酶促反应固定化细胞成本低、操作容易反应物不易与酶接近，尤其是大分子物质，反应效率较低(3)制备固定化酵母细胞取得成功的关键加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环，如果浓度过高，将很难形成凝胶珠，如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数量少，都会影响实验效果。溶化海藻酸钠时要用小火或间断加热，避免海藻酸钠发生焦糊。3．五种重要物质的提取提取物质提取方法提取原理步骤DNA盐析法①DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解不同；②DNA不溶于酒精，但某些蛋

4、白质则溶于酒精①溶解在2mol/L的NaCl溶液中；②加水稀释NaCl溶液至0.14mol/L使DNA析出、过滤；③加入冷却酒精析出DNA血红蛋白凝胶色谱法根据相对分子质量的大小①样品处理；②粗提取；③纯化；④纯度鉴定电脉法根据各种分子带电性质的差异及分子本身大小、形状的不同(1)提取方法总结(续表)提取物质提取方法提取原理步骤玫瑰精油水蒸气蒸馏法利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来①水蒸气蒸馏；②分离油层；③水、过滤橘皮精油压榨法通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油①石灰水浸泡、漂洗；②压榨、过滤静置；③再次过滤胡萝卜素萃取法使提取物溶解在有机溶剂中，蒸馏后得到提取物①粉碎、干

5、燥；②萃取、过滤；③浓缩(2)DNA粗提取与鉴定①哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。②实验过程中两次用到蒸馏水：第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破，释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液。③鉴定DNA：加入二苯胺试剂并沸水浴加热，观察是否出现蓝色。(3)血红蛋白的提取和分离操作程序①样品处理：红细胞的洗涤(除去血浆蛋白等杂质)、血红蛋白的释放(使红细胞破裂，血红蛋白释放出来)、分离血红蛋白溶液(经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来)。②粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。③纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行

6、分离和纯化。④纯度鉴定：一般用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，来鉴定蛋白质的纯度。(4)植物有效成分的提取方法①蒸馏法：芳香油具有挥发性，把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水层，除去水层便得到芳香油。②萃取法：需将植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机溶剂中，使芳香油或色素充分溶解，然后蒸发出低沸点的溶剂，剩下的就是芳香油或色素。③压榨法：橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力直接榨出，这种提取方法叫做压榨法。一、几种传统发酵技术的比较菌种及生活方式原理发酵条件操作提

7、示果酒酵母菌(兼性厌氧型)C6H12O6―→2C2H5OH+2C2温度：18～25℃，最适温度为20℃；pH：5.0～6.0，呈酸性；氧气：前期通入O2，目的是使酵母菌大量繁殖，然后密闭发酵生产酒精选材和材料处理；防杂菌污染；控制发酵条件；正确使用发酵装置果醋醋酸菌(需氧型)C2H5OH+O2―→2CH3COOH+H2O温度：30～35℃。前期和中期不需通入氧气，目的是进行酒精发酵，接种后需保持氧气充足菌种及生活方式原理发酵条件操作提示腐乳毛霉(需氧型)蛋