血细胞形态学.ppt

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1、概述:血细胞及血细胞形态学是临床血液病诊断与治疗及临床医学检验学的基础工作。血细胞形态学适用于临床血液病诊断快速简捷的要求。近年来由于血细胞学及超微结构、免疫学、细胞遗传学、融合基因、造血干细胞及其细胞因子、骨髓造血微环境、基质细胞、树突状细胞、淋巴系细胞发生及其疾病表现，细胞增殖动力学与细胞凋亡以及骨髓组织病理学应用，推动了血液的临床与实验室的新知识迅猛发展，因而当前血液病不能单凭临床与形态学作出诊断，必须以临床和血细胞形态学为基础，把免疫学、细胞遗传学及分子生物学新知识、新技术应用到血液学中，构成现代临床血液学与分子生物学诊断技术，弥补形态学的经验性与

2、主观性带来负面缺陷，才能提高血液病的诊断与治疗水平。进入90年代以来，国内外采用多学科联合技术综合诊断如AL-MIC分（类）型，FAB-CLL诊断分（类）型方案、MIC对MDS诊断要求，已被广泛采用或正趋于完善。近年来，血细胞形态学诊断技术正在进入显微图像、血液病诊断与鉴别诊断、CL诊断与治疗及教学系统多媒体软件等。还将显微镜与微机相连，应用存储、分类、检索软件、编辑、打印诊断报告，并可附多幅细胞图像。从软件水平看，国内几家此类产品尚属探索性，尚不成熟，各有优缺点，有待软件专业与应用专业人员密切合作，生产出高质量产品。血细胞形态学基本概念及临床应用：血

3、细胞形态学：观察血细胞形态和数量及其比例的变化来研究造血器官的结构和功能是血液学的重要组成部分，是很早就开展的一门学科，是诊断造血系统疾病最基本、最简便实用的检查方法之一，被临床普遍应用。正常人的血液及造血器官中，各种血细胞的数量有一定的正常范围，不同血细胞及细胞发育的不同阶段有一定形态结构特点。在造血系统疾病中，如果造血功能发生紊乱，就会从血细胞形态学的量变和质变中反映出来，因此，可将形态学变化作为血液病的诊断依据。几种血细胞形态学的检查方法：1.光镜（瑞氏-姬姆萨染色）是血细胞形态学最基本和最常用的检查方法，被看成是血细胞形态学的基本内容，最广泛应用

4、于临床实验室。2.细胞化学染色：是细胞学和化学两者结合的形态学方法，其目的和特点是细胞保持完整组织结构。在细胞个体组织的单位上，显示化学结构成分的定性或半定量。在血液学中应用的意义：（1）研究血细胞化学成分及代谢功能；（2）协助血液病的诊断与鉴别诊断，尤其是急性白血病分型及鉴别诊断；（3）观察血液病的疗效及判断预后；（4）探索血液病的发病机制。3.相差镜检查：用于观察未染色细胞的内部结构及活细胞的活动及形态，并结合细胞培养，观察细胞的生长、成熟、衰亡过程及对各种刺激的反应，可采用显微镜摄影术或显微电影将活细胞活动拍摄和记录下来。4.电镜检查：

5、有透射和扫描电镜两种，它的出现和应用对细胞学的进展是一个重大的突破。透射电镜的分解力可达到2-3埃左右，把细胞放大到几十万倍，能观察到一般电镜中无法观察到的细胞内超微结构。瑞氏染色法（WrightsStain）：细胞染色机制：染色是将细胞经染色剂的物理和化学作用，使其清楚显示细胞各个组成成分，有利辨识细胞形态。染色可分两个步骤：1.染料受相应物质吸附而附着于物质表面；2.固着作用，即染色粒子进入细胞内起化学反应（染色透过细胞膜的学说很多，尚无定论），与相应的物质形成溶解度很低的盐固着于细胞内而显色。染色剂皆有选择作用，其染色不是将细胞全部一齐着色，而只

6、是将其中一部分染色，多余的被冲洗掉。目前多以吸附学说（电力吸附、机械吸附、化学吸附）来解释。基本概念1.瑞氏染料是碱性染料美蓝和酸性染料伊红合称伊红美蓝染料即瑞氏染料。伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸色，故称伊红为酸性染料。美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。2.用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。甲醇ME（瑞氏染料）──→M++E-在配

7、置的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染成蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料的吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。3.缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察PH的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。缓冲液须保持一定的PH使染色稳定，PBS的PH一般在6.4-6.8，偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料可与

8、缓冲液中的碱基起中和作用，使PH恒定。（三）瑞氏染液配制：1.瑞氏