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时间:2020-06-12
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1、生物技术实践一、传统发酵技术1.果酒制作:酶1)原理:酵母菌的无氧呼吸反应式:C6H12O6――→2C2H5OH+2CO2+能量。2)菌种来源:附着在葡萄皮上的野生酵母菌或人工培养的酵母菌。3)条件:18-25℃,密封,每隔一段时间放气(CO2)4)检测:在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈灰绿色。2、果醋制作:1)原理:醋酸菌的有氧呼吸。O2,糖源充足时,将糖分解成醋酸O2充足,缺少糖源时,将乙醇变为乙醛,再变为醋酸。酶C2H5OH+O2――→CH3COOH+H2O2)条件:30-35℃,适时通入无菌空气。3、腐乳制作:1)菌种:青霉、酵母、
2、曲霉、毛霉等,主要是毛霉(都是真菌)。2)原理:毛霉产生的蛋白酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和aa;脂肪酶将脂肪水解为甘油和脂肪酸。3)条件:15-18℃,保持一定的湿度。4)菌种来源:空气中的毛霉孢子或优良毛霉菌种直接接种。5)加盐腌制时要逐层加盐,随层数加高而增加盐量,盐能抑制微生物的生长,避免豆腐块腐败变质。4、泡菜制作:酶1)原理:乳酸菌的无氧呼吸,反应式:C6H12O6――→2C3H6O3+能量2)制作过程:①将清水与盐按质量比4:1配制成盐水,将盐水煮沸冷却。煮沸是为了杀灭杂菌,冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不
3、受影响。②将新鲜蔬菜放入盐水中后,盖好坛盖。向坛盖边沿的水槽中注满水,以保证乳酸菌发酵的无氧环境。3)亚硝酸盐含量的测定:①方法:比色法;②原理:在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。二、微生物的培养与应用1、培养基的种类:按物理性质分为固体培养基和液体培养基,按化学成分分为合成培养基和天然培养基,按用途分为选择培养基和鉴别培养基。12、培养基的成分一般都含有水、碳源、氮源、无机盐P143、微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落。4、培养基还需满足微生物对PH、特
4、殊营养物质以及O2的要求。5、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。6、常用灭菌方法有:灼烧灭菌,将接种工具如接种环、接种针灭菌;干热灭菌:如玻璃器皿、金属用具等需保持干燥的物品。高压蒸汽灭菌:如培养基的灭菌。7、用固体培养基对大肠杆菌纯化培养,可分为两步:制备培养基和纯化大肠杆菌。8、固体培养基的制备:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板9、微生物常用的接种方法:平板划线法和稀释涂布平板法。10、平板划线法是通过连续划线,将菌种逐步稀释分散到培养基表面,稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,分别涂布到培养基表面。当它们稀释到一定程度后,
5、微生物将分散成单个细胞,从而在培养基上形成单个菌落。11、微生物的计数方法:活菌计数法、显微镜直接计数法、滤膜法。12、活菌计数法就是当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少个活菌。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察的只是一个菌落。13、显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法,但它包括了死亡的微生物。14、设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响。提高实验结果的可信度。①如何证明培养基是
6、否受到污染:实验组的培养基中接种要培养的微生物,对照组中的培养基接种等量的蒸馏水(设置空白对照)。②如何证明某选择培养基是否有选择功能:实验组中的培养基用该选择培养基,对照组中培养基用普通培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)。如果普通培养基的菌落数明显大于选择培养基中的数目,则说明该选择培养基有选择功能。15、如何分离分解尿素的细菌?培养基中以尿素为唯一氮源,加入酚红指示剂,如果PH升高,指示剂变红,可初步鉴定该菌能分解尿素。16、如何分离分解纤维素的微生物?以纤维素为唯一碳源的培养基。17、纤维素酶是一种复合酶,至少包括三组分:C1酶、CX酶和葡萄
7、糖苷酶。前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。18、筛选纤维素分解菌的方法:刚果红染色法,其原理是刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红—纤维素的复合物无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。(产生了透明圈,说明纤维素被分解了,说明有纤维素分解菌)2三、植物组织培养1、菊花组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。2、常用的培养基是MS培养基:主要成分包括:大量元素:N、P、K、Ca、Mg、S;微量元素:B、
8、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co;有机物:如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素以及蔗糖等,常常还要添加植物激素。3、生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的
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